蛋白 相关试剂.doc

4．牛血清蛋白(BSA）（10mg/ml） 组份浓度 10mg/ml牛血清蛋白 配制量 10ml 配制方法 1.称量下列试剂。 牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶） 100mg 2.向15ml试管中加入9.5ml的去离子水。 3.把称好的试剂装入含9.5ml的去离子水的试管中，（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白）盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止，不要涡旋混合。 4.加去离子水将溶液定容至10ml后，然后分装成小份贮存于-20℃。 5．二硫苏糖醇（DTT）（1mol/L） 组份浓度 1mol/L二硫苏糖醇 配制量 32.4ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于100 ml烧杯中 二硫苏糖醇 5g 2.向100 ml烧杯中加入32.4ml水或0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2），充分搅拌溶解。 3. 分成小份贮存于-20℃。 注意事项：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 6．苯甲基磺酰氟（PMSF）（100mmol/L） 组份浓度 100mmol/L PMSF 配制量 10ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中 苯甲基磺酰氟 174mg 2.向15ml试管中加入9.5ml异丙醇，充分搅拌溶解，定容到10ml。 3. 分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 注意事项：PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 7．蛋白酶K（proteinase K）（20mg/ml） 组份浓度 20mg/ml蛋白酶K 配制量 10ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中 蛋白酶K 200mg 2.向15ml试管中加入9.5ml水，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml。 3. 分成小份贮存于-20℃。 8．过硫酸铵溶液（10%） 组份浓度 10%过硫酸铵溶液 配制量 10ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中 过硫酸铵 1g 2. .向15ml试管中加入9.5ml水，充分搅拌溶解，定容到10ml。 3. 可在4℃保存数周。 9．β-巯基乙醇（BME）溶液 组份浓度 14.4mol/Lβ-巯基乙醇 配制方法 一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。 注意事项：BME或含有BME的溶液不能高压处理。 10．十二烷基硫酸钠（SDS）溶液（10%） 组份浓度 10%十二烷基硫酸钠 配制量 1L 配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。 十二烷基硫酸钠 100g 2.向烧杯中加入约900 ml的去离子水，加热至68℃助溶。 3.加去离子水将溶液定容至l L后，分装备用。 注意事项：SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10% SDS溶液无须灭菌。 11．丙烯酰胺溶液（30%） 组份浓度 30%丙烯酰胺 配制量 100ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于100ml烧杯中。 丙烯酰胺 29g N，N’-亚甲双丙烯酰胺 1g 2.向烧杯中加入约60 ml的去离子水，加热至37℃溶解。 3.加去离子水将溶液定容至100m后，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 注意事项：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman