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精品文档 小鼠免疫组织及免疫细胞的观察 【实验原理】 免疫器官、组织及细胞是机体免疫系统的重要组成部分。中枢免疫器官包括 胸腺和骨髓， 是 T 淋巴细胞及其他各类免疫细胞发生、 发育和分化的场所， 外周 免疫器官包括脾胀、 淋巴结和粘膜相关淋巴组织是免疫应答的场所。 各类免疫细 胞直接参与免疫系统对抗原类物质的免疫应答， 完善的免疫器官组织结构和正常 的免疫细胞种类和数量是机体免疫功能发挥正常的基本条件。 【试剂和器材】 小鼠、棉签、解剖台、平皿、大头针、手术剪子、手术镊子、载玻片、瑞士染液、 细胞筛 【操作方法】 1. 取一只小鼠， 采用颈部脱臼法处死， 将小鼠放到解剖台上， 沿腹中线剪开皮肤 且不破坏腹膜和胸膜， 剪开腹膜，打开腹腔和胸腔， 观察胸腺所在的位置和形状。 2. 分离脾细胞：取出脾胀，去除其周围的脂肪组织，用剪子剪碎脾脏，放入细胞 筛中，用载玻片清研脾胀，滴加生理盐水，使脾细胞分散成细胞悬液。 3. 脾细胞染色观察： 取少量细胞悬液置于载玻片上， 与室温晾干， 加瑞士染色液 甲染色 1min，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色 5min，用自来水冲洗，让染液漂 走，置于光学显微镜下观察染色脾细胞。 【结果观察】 小鼠脾细胞瑞士染色镜下观察 【注意事项】 1. 正确抓取小鼠，防止被鼠咬伤。 2. 脾脏分离完整，清研轻柔。 3. 染色时间不宜过长或过短。 . 【讨论】 脾脏具有多种重要的生理功能 , 参与并调节血液、免疫、内分泌系统的运转 , 绝非可有可无 ; 脾脏功能在疾病的不同阶段扮演不同的角色 , 有时甚至完全相反 , 即具有双向性、时向性的特点。 1. 脾切除术后暴发性感染 全脾切除术后 OPSI 的发生率约为 1 %～ 。 1 欢迎下载 精品文档 2.4 % 。虽然 OPSI 的发生率不是很高 , 但脾脏切除后 , 在由肺炎球菌导致的感染 中毒性休克中 , 50 % 患者的病情迅速进展 , 并最终导致死亡。 脾脏为全身最大 的淋巴器官 , 血循环相当丰富 , 且脾脏具有延缓微循环的作用 , 有利于清除和 吞噬多种抗原 , 减轻机体感染的发生。 同时脾脏拥有大量重要的免疫细胞及免疫 因子 , 如 T 细胞、B 细胞、 K 细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞、杀伤细胞、 淋巴因子活化杀伤细胞 (LAK 细胞 ) 、树突状细胞。 免疫因子包括 tufstin 因子、 备解素即 P 因子、纤维结合蛋白免疫核糖核酸 环磷酸鸟苷内源性细胞毒因子、 调理素和补体等。 而脾切除后 , 脾脏所产生的免疫因子及免疫细胞消失 , 血浆中免 疫球蛋白 IgM、IgG 下降 , 巨噬细胞活性下降 , 补体旁路活性下降及自身抗体活性 增强 , 使免疫系统失衡 , 导致机体易感性增加 , 甚发生 OPSI 。 2. 关于 tufstin 是主要由脾脏产生的促吞噬激素 , N ajjar 于 1970 年首先 发现。是 IgG 分子 Fc 段的一种四肽 (T hrLy s -P ro -A rg), 通过激活中性粒 细胞发挥吞噬功能。 需要在白细胞激肽酶及内羧基肽酶的共同作用下释放。