GhMYB43调控棉花抗黄萎病菌的机制解析.pdfVIP

摘 要 植物在自然环境中生存，随时都要面临病原菌的侵害。在长期进化过程中，植物建 立了自己的免疫系统去感知和响应生物胁迫，激活体内免疫应答反应来保护自身不受侵 害。GhLac1 是棉花中能够介导对黄萎病菌、棉铃虫、蚜虫产生广谱抗性的基因，其表 达水平受相应生物胁迫的诱导表达；为进一步解析GhLac1调控棉花抗性响应的分子机 Yeast onehybird GhLac1 制，本研究前期利用酵母单杂交 （ ）筛选 上游调控因子，其中 GhMYB43 （Gh_D12G0544）能够显著激活GhLac1 的表达。本研究以GhMYB43 为研究 对象，探讨其在响应棉花黄萎病菌入侵后的功能及其抗病分子机制，取得主要结果如下： 1. 克隆了GhMYB43基因全长序列并对其保守结构域和亚细胞定位进行分析。结果 显示：GhMYB43 位于陆地棉 （Gossypium hirsutum ）Dt 亚组第 12 号染色体上，其开放 Open ReadingFrame ORF 1131bp 2 3 1 阅读框长 （ ， ） ，包含 个内含子和 个外显子，编码 个含376个氨基酸的蛋白质，具有两个高度保守的MYB 结构域，属于典型的R2R3-MYB Arabidopsis thaliana AtMYB43 类转录因子。因其与拟南芥 （ ） 最为同源，所以将其命名 为GhMYB43。亚细胞定位试验表明GhMYB43 定位于核内。 2. 组织表达模式分析表明GhMYB43在棉花所有组织中均有表达，但在茎中表达量 最高；激素诱导表达模式分析发现GhMYB43 表达水平受茉莉酸甲酯 （Me-JA）处理下 调，受水杨酸（SA）和过氧化氢（H O ）处理上调；接菌诱导表达模式分析显示，GhMYB43 2 2 在6h、12h、24h 时受菌诱导下调表达，且 12h、24h 下调显著，在 48h 后受菌诱导 上调表达。这表明GhMYB43 参与了棉花的免疫响应调控。 3. 为了研究GhMYB43 在棉花抗病中的功能，本研究构建了病毒介导的基因沉默 virus induced gene silencing VIGS VIGS GhMYB43 （ ， ）载体。研究发现通过 抑制 的表 V991 Mock V991 达，棉花对黄萎病菌 的抗病性增强。基因表达分析显示在水处理 （ ）和 处理下，TRV：GhMYB43 植株中JA 和木质素合成路径相关基因的表达量相比于TRV： 00均表现为上调。 4. 为了进一步验证GhMYB43 在棉花抗病中的功能，本研究构建了35S 启动子驱 动的GhMYB43超表达 （35S：：GhMYB43）载体，转化棉花并获得了相应的超表达株系 OE-77 OE-81 OE-8 GhMYB43 （ 、 和 ）。进一步研究发现， 超表达棉花材料中木质素含量 相比于对照 （WT）减少，接种黄萎病强致病菌株V991后，木质素含量显著高于未接种 Mock V991 JA 的棉株；基因表达分析发现在 处理和 处理下，超表达转基因株系中 和木 质素路径相关基因的表达量相比于WT 均表现为下调；抗性鉴定表明，超表达GhMYB43 削弱了棉花对黄萎病菌的抗性。 5. 以上结果表明，GhMYB43 是棉花抗黄萎病反应的负