动物细胞培养技术].pdf

动物细胞培养 动物细胞工程 • 原理和方法：细胞生物学,分子生物学及工程 学原理 • 对象：动物细胞 • 设计改造：动物细胞遗传性 • 目标：创造新物种，提供名贵药品及服务 动物细胞培养特性 及一般培养技术 一 动物细胞培养的概念 从动物体内取出细胞或组织，用物化方法使 其分散成游离细胞，在模拟体内生理环境的体外 条件下进行培养，使之生长繁殖的过程。 二 动物细胞培养特性 1 锚地依赖性（贴壁依赖性）: 大多数动物细胞只能附着或贴在固体或半固体表 面上培养才能生长 ． • 例外：肿瘤细胞 ，血液，淋巴细胞 Vol 465/27 May 2010 Nature • 成纤维细胞型 • 上皮细胞型 • 游走细胞型 • 多形细胞型 2 接触抑制性 : 当细胞长满于附着物表面 ， 相邻细胞表面间相互接触 ， 使细胞对数生长期停止进入稳定期 ， 细胞生长大大减 ，细胞生长，死亡 处于动态平衡。 3 群体效应： 单个细胞难生长 ，聚集成团易生长 4 原代培养(Primary Culture)： （初代培养，初始培养） 定义 :直接从机体取材 （细胞，组织或器官）并置于 体外条件下生长到第一次移植继代培养 。 原代培养细胞特 １）一定程度上反映体内状态； ２）具二倍体遗传性状 （至少７５％细胞与来源动物 的细胞核型 （数目形态）相同）； ３）生物性状 未发生很大变化； ４）用于研究基因表达，药物测试； ５）由多种细胞组成 5 移植继代培养（传代培养）： 移植继代培养号: • 初代、二代、三代N代 细胞培养 6 细胞系和确立细胞系建立： • 细胞系(cell line)原代培养经第一次移植继 代培养成功后 形成的多种细胞群体为细胞 系。 • 确立细胞系 －－－可永久性移植继代培养 细胞形态 染色体结构发生变化 不具有群 体效应、锚地依赖性、接触抑制性，丧失组 织分化能力和脏器特异性，可悬浮培养。 • 有限细胞系、无限细胞系 7 细胞株和确立细胞株建立： 细胞株(cell strain)－－－从原代培养物或细胞系，通 过筛选或克隆培养 ，获得的具特殊性质或特殊标志 的单一类型细胞群体 （如特殊抗原性，抗病毒性） 确立细胞株 －－－可永久性移植继代培养的细胞株， 细胞形态 ，染色体结构发生变化。不具群体效应、 锚地依赖性 、接触抑制性，丧失组织分化能力和脏 器特异性，可悬浮培养。 建立细胞株（系）的要求 •美国ATCC细胞库的入库标准 • 1）组织起源和已经传 • 7）细胞形态 代的代数 • 8）核型 • 2）冻存液 • 9）无菌检测：细菌、真 • 3）细胞活力 菌等 • ）培养液：培养基、 • 10）物种检测：检测同 血清和抗生素 工酶谱 • 5）融解后细胞生长特 性 • 11）反转录酶检测 • 6）接种存活率 • 12）细胞建立者