动物细胞培养技术].pdf 52页

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  • 2020-08-10 发布
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    动物细胞培养 动物细胞工程 • 原理和方法:细胞生物学,分子生物学及工程 学原理 • 对象:动物细胞 • 设计改造:动物细胞遗传性 • 目标:创造新物种,提供名贵药品及服务 动物细胞培养特性 及一般培养技术 一 动物细胞培养的概念 从动物体内取出细胞或组织,用物化方法使 其分散成游离细胞,在模拟体内生理环境的体外 条件下进行培养,使之生长繁殖的过程。 二 动物细胞培养特性 1 锚地依赖性(贴壁依赖性): 大多数动物细胞只能附着或贴在固体或半固体表 面上培养才能生长 . • 例外:肿瘤细胞 ,血液,淋巴细胞 Vol 465/27 May 2010 Nature • 成纤维细胞型 • 上皮细胞型 • 游走细胞型 • 多形细胞型 2 接触抑制性 : 当细胞长满于附着物表面 , 相邻细胞表面间相互接触 , 使细胞对数生长期停止进入稳定期 , 细胞生长大大减 ,细胞生长,死亡 处于动态平衡。 3 群体效应: 单个细胞难生长 ,聚集成团易生长 4 原代培养(Primary Culture): (初代培养,初始培养) 定义 :直接从机体取材 (细胞,组织或器官)并置于 体外条件下生长到第一次移植继代培养 。 原代培养细胞特 1)一定程度上反映体内状态; 2)具二倍体遗传性状 (至少75%细胞与来源动物 的细胞核型 (数目形态)相同); 3)生物性状 未发生很大变化; 4)用于研究基因表达,药物测试; 5)由多种细胞组成 5 移植继代培养(传代培养): 移植继代培养号: • 初代、二代、三代N代 细胞培养 6 细胞系和确立细胞系建立: • 细胞系(cell line)原代培养经第一次移植继 代培养成功后 形成的多种细胞群体为细胞 系。 • 确立细胞系 ---可永久性移植继代培养 细胞形态 染色体结构发生变化 不具有群 体效应、锚地依赖性、接触抑制性,丧失组 织分化能力和脏器特异性,可悬浮培养。 • 有限细胞系、无限细胞系 7 细胞株和确立细胞株建立: 细胞株(cell strain)---从原代培养物或细胞系,通 过筛选或克隆培养 ,获得的具特殊性质或特殊标志 的单一类型细胞群体 (如特殊抗原性,抗病毒性) 确立细胞株 ---可永久性移植继代培养的细胞株, 细胞形态 ,染色体结构发生变化。不具群体效应、 锚地依赖性 、接触抑制性,丧失组织分化能力和脏 器特异性,可悬浮培养。 建立细胞株(系)的要求 •美国ATCC细胞库的入库标准 • 1)组织起源和已经传 • 7)细胞形态 代的代数 • 8)核型 • 2)冻存液 • 9)无菌检测:细菌、真 • 3)细胞活力 菌等 • )培养液:培养基、 • 10)物种检测:检测同 血清和抗生素 工酶谱 • 5)融解后细胞生长特 性 • 11)反转录酶检测 • 6)接种存活率 • 12)细胞建立者

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    • 内容提供方:恬淡虚无
    • 审核时间:2020-08-10
    • 审核编号:8011050040002132

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