昆虫sf9细胞培养.pdf

。 Sf9 培养要点： 温度： 27-28 摄氏度 pH：，sf9 最适的 pH6.2 ，随培养时间的延长， Ph 值会增加 传代时间： 72h （三天左右） 细胞来源： Sf9 （货号 B825-01 ）和 Sf21 （货号 B821-01 ）细胞系是传统的用于杆状病毒表 达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于 InsectSelect 系统。这两 株细胞衍生于 IPLBSF-21 细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。 （以上来自 invitrogen ） 细胞特点：规则的带有颗粒球形。贴壁紧。 标准条件的定义： 培养最低密度： 0.6 /ml （健康对数生长期细胞活率至少应不低于 90 ％。活率低于 90 ％ 细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验） 1× /mL 将出现对数生长状态 传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。 贴壁培养 : 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后 1：5 （细胞体积：最后培养 基体积）稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养 悬浮培养：在细胞密度达到 2.0 × -2.5 × 细胞 /mL 后将密度调整至 0.7 × -1.0 × 细胞 /mL 进行悬浮传代。 确保传代细胞密度不高于 4 × 个/mL 或保持密度高于 1× 个/mL 以达到对数生长状态。 Sf9 悬浮培养所需要的细胞数 培养基： sf-900 Ⅲ SFM （添加 2%的血清减小感染过程中蛋白水解量） 培养瓶与培养体积： 冻存：一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。 细胞需达到 90％活率和 80-90 ％融合的 要求（如：低代次）推荐冻存几管。当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。 - 可编辑修改 - 。 1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存 2-4 管。细胞可是悬浮 或贴壁培养； 2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记； 3. 室温 400-600 ×g 离心 10min 。移除上清。 4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞； 5. 移取 1mL细胞悬液置于无菌冻存管中； 6. 置于 -20 ℃ 1h，然后移至 -80 ℃24-48h ； 7. 储存于液氮中。 转染的细胞： 需要的是对数期的细胞＞ 95%发育能力，可以完成成功的转染。 载氧： 对于最优生长条件和蛋白的表达， 昆虫细胞要求被动的通氧。 积极的通氧系统要求溶 氧饱和在 10%-50% Sf900II 和 sf900 Ⅲ的区别：一般推荐 Sf900II 来大量表达蛋白 Sf900II 含有表面活性剂 （剪切力保护剂 （保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害） ） - 可编辑修改 - 。 当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意 无血清培养基不能直接用于螯合树脂 ，因 为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。 细胞培养的一般顺序： 复苏——传代——传代稳定——冻存 应当遵循的一般过程： 复苏——贴壁培养——悬浮——悬浮扩大培养（产生目标蛋白） （也可不经过贴壁培养，直接悬浮培养） 贴壁时间： 45min 悬浮的转速： 80rpm 附：离心机 rcf 与 g