触酶试验氧化酶试验.pdf

触酶试验 (1) 原理： 触酶又称 过氧化氢酶 ，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为 水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。 (2) 方法： 取洁净玻片 1张，用接种环挑取细菌，加 3 ％H2O2 1滴，立即观察结果。 (3) 结果： 若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。 (4) 应用： 大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用 此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用 耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。 注意事项： ①3％ H2O2溶液要新鲜配制。 ②不宜用血琼脂平板上生长的菌落， 因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。 ③取对数生长期的细菌。 氧化酶试验 （1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。 （2）试剂： 1%盐酸四甲基对苯二胺或 1%盐酸二甲基对苯二胺。 （3）方法：常用方法有三种； 1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。 2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。 3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂 纸上。 （4）结果：细菌在与试剂接触 10秒内呈深紫色， 为阳性。为保证结果的准确性， 分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。 （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳 性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。 2.3 耐酸性染色法 ( 萎－倪二氏法 ) 2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红 0.3g 95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL 将品红溶解于乙醇中， 然后与酚溶液混合。 2.3.2 3% 盐酸－乙醇 浓盐酸 3mL 95% 乙醇 97mL 2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。美蓝 0.3g ；95%乙醇 30mL；0.01%氢氧化钾 溶液 100mL；将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。 2.3.4 染色法 2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定， 滴加石炭酸品红染色液， 徐徐加热至有蒸气 出现，但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染 5min，倾去染 液，水洗。 2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止 ( 所需时间视涂片厚薄而 定，一般为 1～3min) ，水洗。 2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染 30s～1min，水洗，待干，镜检。 2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。 抗酸染色一般步骤 1 ）初染 用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3 滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即 暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热 3-5 分钟，待标本冷却后用水冲洗。 2 ）脱色 3% 盐酸酒精脱色 30 秒~1 分钟；用水冲洗。 3 ）复染 用碱性美兰溶液复染 1 分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。 苯酚、美蓝、盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺、双氧水