PI染色法测细胞周期讲义.pptVIP

资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1，S及G2/M的百分含量，了解细胞的增殖能力；结合DNA指数分析，还可进行凋亡、异倍体等检测。 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * G2 M G0 G1 s 0 200 400 600 800 1000 G0 G1 s G2 M DNA Analysis DNA content Count 2N 4N Normal Cell Cycle 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 细胞浓度及质量要求 单细胞和核的上机浓度应约106/ml。浓度太低，上机时样本的流速不得不提高，这样就会影响检测的CV。浓度太高，则可能导致染料的相对不足，最终使染色不饱和，同样影响CV和检测结果。 制备完成后的标本应用光学显微镜检查其质量：细胞是否聚集或过多的碎片。 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 染料的选择取决于流式激光的配置。488nm的激光下应用PI(碘化丙啶)，由于PI也与RNA结合，所以分析前样本应用Rnase处理.。重要的是染料要足够，以保证饱和结合。PI的推荐浓度是至少20ug/106 个细胞。其最佳浓度为50ug/106 个细胞。 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 操作步骤 取一瓶生长期的A549细胞，倒掉瓶中旧的培养液，加入3mlPBS，细胞生长面在下轻轻晃动细胞瓶，然后去掉液体，加入1ml胰蛋白酶消化1~5分钟（以镜下观察决定） 加入5mlPBS轻轻吹打细胞生长面，制成细胞悬液，将细胞悬液移至15ml离心管中1500rpm离心5min，去上清。 加入500ulPBS轻轻吹打细胞团成细胞悬液，在旋涡状态下逐滴加入2ml-20℃95%冷乙醇，混匀后固定30min。 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 加入5mlPBS，1500rpm离心5min，去上清液。 加入5mlPBS重悬细胞，1500rpm离心5min，去上清液。 加入800ulPI染液，用枪轻轻吹打细胞团，混匀，室温避光染色30min 上机检测。 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 * 影响荧光染色的因素 温度：温度高于20℃时，即出现温度淬灭。 2、PH：PI在7.2~7.6，保持荧光染料分子与溶剂间的电离平衡。 3、荧光染料浓度：染料太少，结合不完全。染料过多，又会出现浓度淬灭现象。 4、固定剂：醛类固定剂会干扰插入性染料与核酸分子的结合，造成荧光发射强度减弱。 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 2020年08月13日 PI染色法测细胞周期 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。