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植物组培中常见污染及其预防措施 1、污染原因 污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育 的现象。组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。细菌污染常在接种1-2d 后 表现，培养基表面出现黏液状菌斑。真菌污染一般在接种后3d 以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛 状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。 造成污染的原因也很多，主要有 (1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底 (2) 外植体消毒不彻底 (3) 接种时不严格无菌操作 (4) 接种和培养环境不清洁 (5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。 材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造 成细菌污染的重要原因。培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜 破损等主要引起真菌污染。 2、污染的预防措施 （1）灭菌要彻底 在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。首先是培养基的灭菌，耐高温 的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会 在培养基表面产生细菌性的污染。一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。其次，接 种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1 次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌， 特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡， 单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。 （2）选择适当的外植体 要认真地选择外植体，减少外植体上的带菌量。一般多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌多；老 的材料比幼嫩的材料带菌多；田间生长的材料比温室生长的材料带菌多；带泥土的材料比不带泥土的材料 带菌多。 1 用茎尖作外植体时，应在室内或无菌条件下对枝条进行预培养。将枝条用水冲洗干净后插入无糖的营养液 或自来水中，使其发枝。然后以这种新抽的嫩枝作为外植体，可大大减少材料的污染。或在无菌条件下对 才采自田间的枝条进行暗培养，从抽出的徒长黄化枝条上取材，也可明显地减少污染。 （3）外植体消毒 外植体上可能附着外生菌和内生菌。外生菌可以通过表面消毒方法杀灭；而内生菌生长的植物材料内部， 表面消毒难以杀灭，培养一段时间后，病原菌自伤口处滋生。防治内生菌首先将欲取材的植株或枝条放在 温室或无菌培养室内预培养，再在培养液中添加一些抗生素或消毒剂。 （4）环境消毒 不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高。接种和培养环 境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每 年熏蒸2-3 次。平时读接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或喷2%来苏尔消毒。臭氧消毒机对环境消毒 效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。 （5）严格无菌操作 在接种时要严格无菌操作，避免人为因素造成污染。为了使超净工作台有效工作，防止操作区域本身带菌， 要定期读一过滤器进行清洗和更换。对内部的过滤器，不必经常更换，但每隔一定时间要检测操作区的带 菌量，如果发现过滤器失败，则要整块更换。此外还需要测定操作区的风速，通过调压旋钮使操作区的风 速达到无菌操作需要的20-30m/min。 2