植物生理学 实验6 种子生活力的测定.pptVIP

实验六 植物种子生活力的快速测定 实验目的 1. 了解种子生活力快速测定的方法 2. 理解 TTC/BTB/ 染料法测定种子生活力的原理 ? 种子生活力（ seed viability ）：指种子能够萌发 的潜在能力或种胚具有的生命力。 ? 种子活力（ seed vigor ）： TTC 法 1. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应， 而无生活力的种胚则无此反应。 2. 当 TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被 NADH 或 NADPH 还原时，可产生红色的三苯甲腙（ TTF ），胚便染 成红色。 3. 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。 实验原理 TTC 还原反应如下： 氯化三苯基四氮唑 三苯甲腙 BTB 溴麝香草酚蓝法 1. 活细胞呼吸释放 CO 2 ， CO 2 溶于水成 H 2 CO 3 解 离，使种胚周围环境 酸度增加 ，用 BTB 来反映 酸度的改变； 2. BTB 变色范围为 pH6.0-7.6 ，酸性呈 黄色 ，碱 性呈 蓝色 ，中间经过 绿色 （变色点为 pH7.1 ）。 3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。 染料染色法 1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。 2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。 染料染色法 TTC 法 材料、设备及试剂 （一）材料：小麦种子 （二）仪器设备： 1. 小烧杯； 2. 刀片； 3. 镊子； 4. 培养箱 （三）试剂： 1. 0.12 ％ -0.5 ％ TTC 溶液（ TTC 可直接溶于水，溶于水后， 呈中性， pH7 ± 0.5 ，不宜久藏，应现用现配）。 2. 5 ％红墨水（酸性大红 G ） 3. BTB 溶胶 BTB 法 1. 煮沸的 1 ％ BTB 琼脂胶约 15-20 ml ，冷却倒胶至 培养皿（ 1/2 皿）； 2. 取 30 粒完好的小麦种子， 种胚 向下插入胶 ( 不软 不硬 ) ； 3. 将培养皿置于 35 ℃ 下培养 1hr ，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。 实验步骤 TTC/ 红墨水染色法 1. 将种子用温水（ 30 ℃ ）浸泡 2-6h ，使种子充分吸胀； 2. 随机取小麦种子 30 粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC 备用，另一半红墨水法备用； 3. 将 TTC 备用的一半种子浸于 5 ml TTC 中，于恒温箱（ 30- 35 ℃ ）中保温 30min ； 4. 将红墨水法的另一半种子用 5 ml 红墨水浸 5 min （室温）； 5. 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出 TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子 1-2 次，观察种胚被染色的情况。 不同方法测定种子生活力统计表 方法 供试粒数 有生活力 种子粒数 无生活力 种子粒数 有生活力种子 占供试粒数的 % TTC 30 红墨水 30 BTB 30 数据记录与处理 ? 沿种胚中央准确切开，同粒 TTC/ 红墨水法各一半 ? TTC 溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶 中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 ? 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 注意事项