外源D-果糖促进鲁氏酵母合成呋喃酮碳代谢的分子机制研究.pdfVIP

目录 目 录 摘 要I Abstract III 1 文献综述 1 1.1 鲁氏酵母 1 1.1.1 鲁氏酵母的简介 1 1.1.2 鲁氏酵母的研究现状 1 1.2 呋喃酮的理化性质2 1.2.1 呋喃酮简介2 1.2.2 呋喃酮的研究现状2 1.3 鲁氏酵母的碳代谢研究4 1.3.1 鲁氏酵母胞内EMP 碳代谢途径合成HDMF 4 1.3.2 鲁氏酵母胞内PP 途径合成HEMF 5 1.4 pH 值对鲁氏酵母的影响 5 1.5 微生物多组学技术 6 1.5.1 微生物转录组学 6 1.5.2 微生物代谢组学 7 1.6 本文的研究目的与主要内容 7 1.6.1 研究目的与意义 7 1.6.2 项目的研究内容 8 1.6.3 技术路线 9 2 材料与方法 10 2.1 试验材料 10 2.1.1 菌种、培养基和引物 10 2.1.2 主要试剂 11 2.1.3 仪器和设备 11 2.2 试验方法 12 2.2.1 鲁氏酵母的培养与活化 12 2.2.2 酵母菌活菌数测定方法及细胞干重含量测定 13 2.2.3 细胞光密度与pH 值测定 13 i 外源D-果糖促进鲁氏酵母合成呋喃酮碳代谢的分子机制研究 2.2.4 鲁氏酵母转录组文库的构建及测序 13 2.2.5 基于RNA-Seq 技术的转录组学分析 13 2.2.6 总RNA 的提取、反转录以及验证 14 2.2.7 实时荧光定量PCR 验证分析 15 2.2.8 呋喃酮合成关键酶的测定 16 2.2.9 LC-MS/MS 分析 17 2.2.10 鲁氏酵母呋喃酮检测 18 2.2.11 生物信息学分析 19 2.3 数据处理20 3 结果与分析21 3.1 D-果糖对鲁氏酵母细胞生长的影响21 3.1.1 添加D-果糖对鲁氏酵母生物量的影响21 3.1.2 添加D-果糖对鲁氏酵母细胞菌数以及OD 值的影响21 3.1.3 添加D-果糖对鲁氏酵母菌落生长情况的影响22 3.2 呋喃酮高效液相色谱检测优化23 3.2.1 HDMF 检测波长的选择23 3.2.2 色谱柱的选择23 3.2.3 进样量的选择23 3.2.4 洗脱条件的优化23 3.2.5 标准曲线的绘制26 3.3 添加D-果糖对HDMF 和HEMF 产量的影响26 3.4 pH 值对鲁氏酵母生长情况及产呋喃酮的影响27 3.4.1 添加D-果糖对鲁氏酵母发酵液pH 值的影响27 3.4.2 pH 值对鲁氏酵母OD 值的影响28 3.4.3 pH 值对鲁氏酵母产HDMF 的影响29 3.5 转录组学分析 30 3.5.1 转录组测序及初步分析 30 3.5.2 差异表达基因分析 30 3.5.3 GO 富集分析 31 ii