金葡菌奶牛乳房炎抗性相关 miRNA 的筛选及其靶基因调控机制研究.pdfVIP

金葡菌奶牛乳房炎抗性相关 miRNA 的筛选及其靶基因调控机制研究.pdf

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目 录 目 录 目录 I 摘 要 I AbstractIII 1 文献综述 1 1.1 奶牛乳房炎 1 1.1.1 奶牛乳房炎的常见分类 1 1.1.2 奶牛乳房炎的常见诊断指标 1 1.1.3 奶牛乳房炎的常见治疗方法 1 1.2 奶牛乳房炎抗性相关基因 2 1.2.1 牛整合素β-2 基因2 1.2.2 转运蛋白颗粒复合体9 2 1.2.3 酪氨酸激酶23 1.2.4 其他乳房炎抗性相关基因 3 1.3 金葡菌奶牛乳房炎3 1.4 MiRNAs 4 1.4.1 炎症反应相关miRNAs4 1.4.2 奶牛乳房炎相关miRNAs 研究进展 5 2 材料与方法 7 2.1 健康牛及金葡菌乳房炎患病牛的筛选和鉴定 7 2.1.1 材料 7 2.1.2 方法 8 2.2 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织乳房炎抗性相关差异表达miRNAs 筛选及鉴定... 10 2.2.1 材料 10 2.2.2 方法 10 2.3 Bta-miR-223 对LTA 诱导的Mac-T 细胞炎症反应发生的影响 14 2.3.1 材料 14 I 金葡菌奶牛乳房炎抗性相关miRNA 的筛选及其靶基因调控机制研究 2.3.2 方法 15 2.4 Bta-miR-223 靶基因的鉴定 2 1 2.4.1 材料 2 1 2.4.2 方法 22 2.5 CBLB LTA Mac-T 29 在 诱导 炎症反应中的作用 2.5.1 材料 29 2.5.2 方法 30 2.6 CBLB 在金葡菌诱导BALB/c 小鼠乳房炎症反应中的功能验证 31 2.6.1 材料 31 2.6.2 方法 31 3 结果与分析 35 3.1 健康及金葡菌乳房炎患病牛的筛选与鉴定35 3.1.1 健康及金葡菌乳房炎患病候选牛只的体细胞计数统计35 3.1.2 奶牛乳汁分离病原菌的鉴定 36 3.1.3 乳汁样品中nuc基因的PCR 鉴定 36 3.1.4 健康牛及金葡菌乳房炎患病牛的乳腺组织形态观察37 3.2 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织差异表达miRNAs 筛选及鉴定38 3.2.1 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织小RNAs 测序统计分析38 3.2.2 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织miRNAs 测序统计分析39 3.2.3 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织差异表达miRNAs 分析4 1 3.2.4 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织miRNAs 靶基因预测44 3.2.5 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织差异表达miRNAs 候选靶基因功能分析45 3.2.6 健康牛及金葡菌乳房炎奶牛乳腺组织乳房炎抗性相关miRNAs 鉴定 47 3.3 Bta-miR-223 对LTA 诱导的Mac-T 细胞炎症反应发生的影响47 3.3.1 Bta-miR-223 过表达及干扰细胞模型的构建 47 3.3.2 LTA 诱导Mac-T 细胞炎症模型的构建 49 3.3.3 Bta-miR-223 对LTA 诱导的Mac-T 细胞炎症反应的影响 50 3.4 Bta-miR-223 靶基因的鉴定 52 II 目 录 3.4.1 Bta-miR-223 候选靶基因的筛选 52 3.4.2 B

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