叶绿体的分离和观察.docVIP

生命科学学院 Life 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄 班级：2013级生科一班 学号：201300140062 同组者：曾玮璠 山东大学实验报告 2015年5月10日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：叶绿体的分离和观察 一、目的和要求 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法 二、原理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。一次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。叶绿体的分离应在等身溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体损伤。将匀浆液在1000r/min的条件下离心2分钟，以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5分钟，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在0℃—5℃的条