IL-8生物活性的检测.pptxVIP

IL-8生物活性的测定 基本原理：IL-8是典型的CXC家族趋化因子，对嗜中性粒细胞和T淋巴细胞有趋化作用。IL-8的趋化作用没有种属特异性，因此，可以用豚鼠嗜中性粒细胞代替人嗜中性粒细胞对其进行活性检测。趋化因子诱导的细胞移动方式有两类：化学增活现象，指增强细胞的随机运动，琼脂糖小滴化学动力实验是检测这种活性的比较简易，快速，重复性好的方法。趋化性，指诱导细胞向趋化因子化学浓度高的方向移动。琼脂糖中的趋化实验和微孔小室中的趋化实验则是常用的测定细胞因子趋化活性的方法。微孔小室中的趋化实验：微孔小室中的趋化实验是根据靶细胞（单核巨噬细胞，中性粒细胞或淋巴细胞等）能够趋化性主动迁移，穿过一定孔径的滤膜而设计的。滤膜将小室分隔成上下两部分。靶细胞在上面，趋化因子在下面，趋化因子通过滤膜形成梯度，细胞则沿着梯度穿过膜孔，黏附在膜的下面，计数滤膜下表面的细胞数即可测出趋化因子的趋化能力。趋化材料和趋化时间的选择：趋化滤膜的材料和孔径需根据靶细胞的大小选择；中性粒细胞用3μm孔径的PVPF聚碳酸膜（ Polycarbonate membranes）, 趋化时间为30分钟；单核细胞用8μm孔径的PVPF聚碳酸膜，趋化时间为90分钟；粘附力弱的淋巴细胞则用表面复以明胶或纤粘素的5μm或8μmPVPF聚碳酸膜，以免淋巴细胞穿过膜后落入下室，趋化时间为180分钟。不同趋化因子浓度的确定：趋化因子特异