过表达ZmDWF4提高玉米产量的研究.pdfVIP

符 号 说 明 35S:Cauliflower moaicvirus35Spromoter, 花椰菜花叶病毒35S启动子 BL:Brassinolide, 芸苔甾内酯 BRs:Brassinosteoids, 油菜素内酯 BM:Branch meristem, 分枝原基 CN:campestanol, 菜油甾烷醇 CTAB:Cetyltrimethyl ammoniubromide, 十六烷基三甲基溴化铵 CS:Castasterone, 油菜素甾酮 CR:Campesterol, 油菜甾醇 QC:Quiescent center, 静止中心 DNA:Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 dNTP:Deoxyribonucleosidetriphosphat, 脱氧核糖核苷三磷脂 EDTA:Ethylene diaminetetraceticacid, 乙二胺四乙酸 IM:Inflorescencemeristem, 花序原基 PCR:Polymerasechain reaction, 聚合酶链式反应 RNA:Ribonucleic acid, 核糖核酸 SAM:Shoot apicalmeristem, 茎端分生组织 SDS:Sodium dodecyl sulfate, 十二烷基硫酸钠 SM:Spikeletmeristem, 小穗原基 SPM:Spikelet-pairmeristem, 小穗对原基 目录 中文摘要1 Abstract3 1前言5 1.1油菜素内酯的研究进展5 1.1.1油菜素内酯的生物合成途径5 1.1.2 油菜素内酯的生物合成中的关键基因7 DET2，5α-还原酶7 CPD，C-3氧化酶8 CYP90C1和CYP90D1,C-23羟化酶9 D2、D11和BRD19 DDWF1，C-2 羟化酶10 1.1.3 油菜素内酯的信号转导途径10 油菜素内酯信号通路上游受体蛋白BRI112 油菜素内酯的信号通路中下游负调控蛋白BIN214 油菜素内酯的信号通路下游转录因子BES1和BZR115 BES1和BZR1调控的基因表达的调控网络及机制15 1.1.4 油菜素内酯对植物生长发育的影响16 油菜素内酯对植物营养生长的影响16 油菜素内酯对植物生殖生长的影响17 1.2 油菜素内酯对玉米形态建成的影响18 1.2.1BRI1对玉米形态建成的影响18 1.2.2BRD1对玉米形态建成的影响20 1.2.3NA2 对玉米形态建成的影响21 1.3 油菜素内酯合成基因DWF423 1.3.1ZmDWF4 的分子生物学特征23 1.3.2ZmDWF4 是拟南芥DWF4 的同源蛋白24 1.3.3过表达DWF4基因的转基因植株25 1.4 玉米转基因育种26 1.4.1玉米基因转化的方法26 基因枪介导的玉米基因转化27 农杆菌介导的玉米基因转化27 1.5本研究的目的和意义27 2 材料与方法28 2.1实验材料28 2.1.1植物材料28 2.1.2 菌株、质粒28 2.1.3 酶及生化试剂28 2.2 方法28 2.2.1定量分析目的基因表达量28 RNA 的提取和纯化28 实时定量PCR 分析30 2.2.2 转基因植株目的蛋白的Western Blotting31 植物目的蛋白的提取31 植物目的蛋白的定量31 SDS-PAG 电泳31 2.2.3玉米根系氮素吸收实验32 2.2.4 转基因植株油菜素内酯的测定33 2.2.5转基因植株性状分析33 3 结果与分析35 3.1ZmDWF4 转基因植株的分子检测35 3.2 过表达ZmDWF4 提高自交系产量36 3.3过表达ZmDWF4 促进根系对硝态氮的吸收38 3.3.1过表达ZmDWF4 促进根系对硝态氮的吸收38 3.3.2 过表达ZmDWF4 促进氮响应基因的表达38 3.3.3过表达ZmDWF4 促进氮转运基因的表达39 3.4 过表达ZmDWF4 能改变玉米的农艺性状40 3.5过表达ZmDWF4 叶片转录组测序分析44 3.5.1过表达ZmDWF4 转基因株系的差异表达基因表达模式的验证44 3.5.2 过表达ZmDWF4 转基因株系的差异表达基因的鉴定和功能分类45 3.6过表达ZmDWF4种子转录组分析47 3.6.1过表达ZmDWF4 转基因种子的转录组分析47