亚硝酸盐降解菌的筛选、鉴定及水质调控效果研究.pdfVIP

符 号 说 明 cDNA: complementary DNA, 互补DNA C/N: Carbon to nitrogen ratio, 碳氮比 COD: Chemical oxygen demand, 化学需氧量 LB: Lysogeny broth, 溶菌肉汤 NIR: Nitrite reductase, 亚硝酸盐还原酶 SOD: Superoxide dismutase, 超氧化物歧化酶 PCR: Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应 OD: Optical density, 光密度值 ATP: Adenosine triphosphate, 腺嘌呤核苷三磷酸 CFU: Colony-forming units, 菌落形成单位 V-P 试验: Voges-Prokauer reaction, 乙酰甲基甲醇试验 NXR: Nitrite oxidoreductase, 亚硝酸盐氧化还原酶 NOR: Nitric oxide reductase, 一氧化氮还原酶 目录 摘要I Abstract III 1 前言 1 1.1 亚硝酸盐的来源及危害 1 1.1.1 水中亚硝酸盐的来源 1 1.1.2 亚硝酸盐的危害 1 1.2 降解亚硝酸盐的方法 2 1.2.1 物理吸附法 2 1.2.2 氧化还原法 3 1.2.3 肥水降解法 3 1.2.4 微生物降解法 3 1.3 微生态制剂的研究进展 3 1.3.1 常用的微生态制剂 3 1.3.2 微生态制剂在水产养殖中的应用 5 1.4 水产养殖中芽孢杆菌的研究进展 7 1.4.1 芽孢杆菌的种类 7 1.4.2 芽孢杆菌的作用 7 1.4.3 芽孢杆菌在水产养殖中的应用 8 1.5 研究目的与意义 9 2 材料与方法 9 2.1 试验材料与仪器设备 9 2.1.1 材料与试剂 9 2.1.2 主要仪器设备 12 2.2 试验方法 13 2.2.1 亚硝酸盐降解菌的分离 13 2.2.2 菌株的鉴定 14 2.2.3 菌株的安全性检测 21 2.2.4 菌株培养条件的优化 22 2.2.5 菌株发酵培养基的优化 22 2.2.6 水质指标测定 25 2.2.7 统计分析 27 3 实验结果 28 3.1 亚硝酸盐降解菌的分离鉴定 28 3.1.1 初步分离与筛选 28 3.1.2 室内降解效果试验 28 3.1.3 菌株JY-1 最适降解浓度 29 3.1.4 菌株的鉴定 30 3.2 菌株安全性检测 35 3.3 菌株JY-1 培养条件优化 35 3.3.1 C/N 对菌株生长情况的影响 35 3.3.2 pH 对菌株生长情况的影响 36 3.3.3 温度对菌株生长情况的影响 36 3.3.4 盐度对菌株生长情况的影响 37 3.3.5 转速对菌株生长情况的影响 38 3.4 菌株JY-1 发酵培养基优化 38 3.4.1 碳源的筛选及浓度优化 38 3.4.2 氮源的筛选及浓度优化 39 3.4.3 无机盐及其组合的筛选 40 3.4.4 无机盐组合浓度的筛选 41 3.5 菌株JY-1 降解途径研究 42 3.5.1 亚硝酸盐含量的变化 42 3.5.2 氨氮含量的变化 43 3.5.3 硝酸盐含量的变化 43 3.5.4 总氮含量的变化 44 3.5.5 亚硝酸盐还原酶基因的扩增与测序 44 4 讨论 47 4. 1 降解亚硝酸盐菌的筛选分离 47 4.2 细菌的分类与鉴定方法 47 4.3 培养条件优化 48 4.4 发酵培养基优化 49 4.5 降解亚硝酸盐途径 49 5 结论 52 参考文献 53 致 谢 60 山东农业大学硕士专业学位论文 摘要 随着水产养殖业的迅速发展，亚硝酸盐会在水体中大量累积，亚硝酸盐可氧化血液 中的亚铁血红蛋白，使其变成高铁血红蛋白，因此亚铁血红蛋白会失去携氧能力，从而 各种组织会出现缺氧现象。过量亚硝酸盐会引起中