小麦芽木聚糖内切酶的纯化鉴定及对小麦源阿拉伯木聚糖的降解特性.pdfVIP

符 号 说 明 AX: Arabinoxylan, 阿拉伯木聚糖 NSP: Non-starch polysaccharide, 非淀粉多糖 FA: Ferulic acid, 阿魏酸 WEAX: Water-extracted arabinoxylan, 水萃取阿拉伯木聚糖 WUAX: Water-unextracted arabinoxylan, 非水萃取阿拉伯木聚糖 Ara: Arabinose, 阿拉伯糖 Xyl: Xylose, 木糖 A/X: Arabinose/Xylose, 阿拉伯糖/木糖 AXOS: Arabinose xylooligosaccharide, 阿拉伯低聚木糖 GH: Glycoside hydrolase, 糖苷水解酶 pI: Isoelectric point, 等电点 Da: Dalton, 道尔顿 Mr : Apparent relative molecular weight, 表观相对分子量 RBB-Xylan: 4-O-Methyl-D-xylan dyed with Remazol Brilliant Blue R SDS: sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, 十二烷基硫酸钠聚 丙烯酰胺凝胶电泳 avDP: Average degree of polymerization, 平均聚合度 LC-MS/MS: liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry, 液相串联二级 质谱 目录 中文摘要 1 Abstract 3 1 前言 5 1.1 阿拉伯木聚糖 5 1.1.1 阿拉伯木聚糖的来源 5 1.1.2 阿拉伯木聚糖的结构 5 1.1.3 阿拉伯木聚糖的理化性质 7 1.1.4 阿拉伯木聚糖的功能 8 1.1.5 阿拉伯低聚木糖 8 1.2 木聚糖酶 9 1.2.1 木聚糖酶的结构 9 1.2.2 木聚糖酶的酶学性质 10 1.2.3 木聚糖酶的分离纯化 11 小麦源木聚糖酶的分离纯化 11 其他来源木聚糖内切酶的分离纯化 12 1.2.4 木聚糖酶的研究进展 13 1.2.5 木聚糖酶的降解特性 14 1.2.6 木聚糖酶的应用 15 1.3 立题背景及研究目的意义 15 1.4 主要研究内容及目标 16 1.4.1 研究内容 16 β-1,4-木聚糖内切酶的酶学性质研究 16 β-1,4-木聚糖内切酶的分离纯化及质谱鉴定 16 β-1,4-木聚糖内切酶对小麦AX 的降解特性 16 1.4.2 研究目标 17 1.4.3 研究路线 17 2 材料与方法 18 2.1 实验材料 18 2.2 主要试剂 18 2.3 主要仪器 19 2.4 实验方法 20 2.4.1 β-1,4-木聚糖内切酶的酶学性质 20 小麦芽的制备以及β-1,4-木聚糖内切酶粗酶液的提取 20 小麦芽β-1,4-木聚糖内切酶活力测定 20 标准曲线的制定 21 最适pH 的测定 21 pH 稳定性的测定 21 最适温度的测定 22 温度稳定性的测定 22 金属离子对小麦芽β-1,4-木聚糖内切酶酶活力的影响 22 2.4.2 β-1,4-木聚糖内切酶的分离纯化 22 粗酶液的提取 22 硫酸铵分级沉淀 22 阳离子交换层析 23 阴离子交换层析 23 二次阴离子交换层析 23 2.4.3 β-1,4-木聚糖内切酶对小麦源水溶性阿拉伯木聚糖的降解作用 23 2.4.4 β-1,4-木聚糖内切酶对小麦源水不溶性阿拉伯木聚糖的降解作用 24 2.5 分析方法 24 2.5.1 酶活测定方法 24 β-1,4-木聚糖内切酶酶活测定 24 阿拉伯呋喃糖苷酶酶活测定 25 木糖苷酶酶活测定 25 2.5.2 蛋白质含量的测定 26 2.5.3 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 26 2.5.4 液相串联二级质谱分析 27 样品处理 27 质谱检测 27