小麦EMS突变群体的创建及功能基因的鉴定.pdfVIP

符号说明 DON: Deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 DNA: Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 dTTP: deoxythymidine triphosphate, 脱氧胸苷三磷酸 dUTP: deoxyuridine triphosphate, 脱氧尿苷三磷酸 EMS: Ethyl methanesulfonate, 甲基磺酸乙酯 FHB: Fusarium head blight, 赤霉病 F. g : Fusarium graminearum, 禾谷镰刀菌 GGPP: Geranylgeranyl pyrophosphat, 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸 PCR: Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应 PDS: Phytoene Desat Srase, 八氢番茄红素脱氢酶 PSY: Phytoene synthase, 八氢番茄红素合成酶 QTL: Quantitative Trait Locus, 数量性状座位 RNA: Ribonucleic Acid, 核糖核酸 RNAi: RNA interference, RNA 干扰 TILLING: Targeting induced local lesions in genomes, 定向诱导基因组局部突变 YP ：Yellow pigment ， 黄色素 YPC: Yellow Pigment Content ，黄色素含量 ZDS: ζ-carotene desaturase, ζ- 胡萝卜素脱氢酶 目 录 摘要 I AbstractII 1 引言1 1.1 小麦赤霉病1 1.1.1 小麦赤霉病流行区域1 1.1.2 小麦赤霉病病症2 1.1.3 小麦赤霉病的防治3 1.1.4 小麦赤霉病抗性的鉴定4 1.2 黄色素5 1.2.1 黄色素的组成成分及生物合成途径5 1.2.2 黄色素的重要生物学功能5 1.2.3 八氢番茄红素合成酶PSY 基因6 1.2.4 小麦黄色素研究进展6 1.3 小麦功能基因组学研究进展7 1.3.1 反向遗传学技术7 1.3.2 突变体库的创建8 1.3.3 突变体筛选 11 1.4 小麦转基因技术研究进展12 1.4.1 小麦遗传转化方法12 1.4.2 小麦外植体的选择13 1.4.3 小麦转基因技术在小麦育种上的应用13 1.5 本研究的内容及意义14 2 材料与方法14 2.1 试验材料14 2.2 突变群体的创建14 2.2.1 EMS 预处理14 2.2.2 EMS 处理15 2.2.3 M1 和M2 的种植15 2.3 Fhb7 基因TILLING 检测15 2.3.1 TILLING 群体DNA 的提取15 2.3.2 PCR 引物设计及扩增17 2.3.3 琼脂糖凝胶的制备及电泳17 2.3.4 点突变密度计算17 2.3.5 抗赤霉病表型鉴定18 2.4 面粉色泽相关突变体的筛选18 2.4.1 面粉色泽相关突变体的筛选18 2.4.2 面粉色泽相关突变体的繁殖加代19 2.4.3 TILLING 群体相关突变体的验证19 2.5 类胡萝卜素含量检测19 2.5.1 样品提取流程19 2.5.2 色谱质谱采集条件19 2.6 Psy 基因的克隆及同源分析20 2.6.1 TRIZOL 法提取小麦RNA 20 2.6.2 RNA 质量和纯度的检测21 2.6.3 RT-PCR 扩增Psy 基因序列21 2.6.4 RT-PCR 产物的回收纯化21 2.6.5 Psy 基因同源分析21 2.7 自身启动子表达载体创建22 2.8 农杆菌介导法22 2.9 转基因植株的鉴定23 3 结果与分析23 3.1 小麦突变群体的创建23 3.1.1 EMS 处理的适宜诱变剂量23 3.1.2 EMS 诱变群体创建24 3.2 Fhb7 基因TILLING 检测24 3.2.1 Fhb7 基因的突变体筛选24 3.2.2 突变体抗赤霉病表型鉴定26 3.3 面粉色泽相关突变体的筛选27 3.3.1 面粉色泽相关突变体的筛选与加代繁殖27 3.3.2 TILLING 群体相关突变体的验证28