八倍体小偃麦SNTE20衍生后代的分子细胞遗传学鉴定.pdfVIP

符 号 说 明 CTAB ：Cetyltrimethyl ammonium bromide ，十六烷基三甲基溴化铵 DNA ：Deoxyribonucleic acid ，脱氧核糖核酸 FISH ：Fluorescent in situ hybridization ，荧光原位杂交 GISH ：Genomic in situ hybridization ，基因组原位杂交 ISH ：In situ hybridization ，原位杂交 IT ：Intron targeting ，内含子靶细胞 PCR ：Polymerase chain reaction ，聚合酶链式反应 RTC ：Root tip cell ，根尖细胞 SSC：Saline sodium citrate，柠檬酸钠盐溶液 ssDNA：Salmon sperm DNA，鲑鱼精DNA RFLP ：Restriction fragment length polymorphism ，限制性片段长度多态性 SSR：Simple sequence repeat，简单重复序列 SNP：Single nucleotide polymorphism，单核苷酸多态性 DAPI ：4’,6-diamidino-2-phenylindole ，4’6-二脒基-2-苯基吲哚 DS ：dextran sulphate ，硫酸葡聚糖 EDTA ：ethylene dia mine tetra acetic acid ，乙二胺四乙酸 SDS：sodium dodecyl sulfate，十二烷基磺酸钠 目 录 中 文 摘 要I Abstract III 1 前言 1 1.1 普通小麦的基因组测序 1 1.2 长穗偃麦草在小麦遗传改良中的应用 2 1.2.1 长穗偃麦草概述3 1.2.2 长穗偃麦草的染色体组成3 1.2.3 长穗偃麦草在遗传改良中的应用5 1.2.4 八倍体小偃麦在遗传改良中的应用6 1.2.5 小麦-长穗偃麦草易位系7 1.3 普通小麦遗传背景下外源遗传物质的鉴定 8 1.3.1 形态学鉴定8 1.3.2 生物化学鉴定8 1.3.3 细胞学鉴定9 1.3.4 分子标记鉴定 11 1.4 本研究的目的意义 12 2 材料与方法 12 2.1 供试材料 12 2.2 技术路线 13 2.3 试验地点 13 2.4 试验方法 13 2.4.1 田间种植 13 2.4.2 农艺性状调查 13 2.4.3 成株期白粉病抗性鉴定 13 2.4.4 细胞学鉴定 14 根尖染色体制片 14 2.4.5 原位杂交鉴定 14 探针制备 15 基因组原位杂交 15 荧光原位杂交 16 基因组DNA 的提取 17 2.4.6 分子标记分析 18 PCR 反应体系 17 扩增程序 17 3 结果与分析 20 3.1 八倍体小偃麦SNTE20 的细胞学鉴定及IT 标记筛选 20 3.1.1 SNTE20 的细胞学鉴定 20 3.1.2 IT 标记筛选 20 3.2 小偃麦农艺性状鉴定 21 3.3 小偃麦成株期白粉病抗性鉴定 23 3.4 小偃麦异代换系的鉴定 23 3.4.1 GISH 和FISH 鉴定 23 3.4.2 IT 标记鉴定24 3.5 小偃麦易位系的鉴定 25 3.6 小偃麦渐渗系的鉴定 26 3.6.1 原位杂交鉴定 26 3.6.2 IT 标记鉴定 30 4 讨论 31 4.1 八倍体小偃麦的应用价值 31 4.2 本研究中鉴定方法的应用 32 4.3 小偃麦种质系的应用价值 32 参考文献 34 附 录 43 致 谢 46 山东农业大学硕士学位论文 中 文 摘 要 长穗偃麦草[Thinopyrum ponticum (Podp.) Barkworth and Dewey ，2n = 10x = 70]为多 年生的偃麦草属植物，与小麦属亲缘关系较近，具有生长繁茂、抗多种小麦病害等优良 性状，是进行小麦遗传改良的重要基因资源。利用普通小麦与十倍体长穗偃麦草杂交获 得的八倍体小偃麦，是将长穗偃麦草优异基因向小麦转移的重要桥梁。本实验室在八倍