分子生物学名词解释重点之重.docVIP

12.感受态细胞（ 12.感受态细胞（competent cell）:用理化方法人工诱导细胞，使之处于易于吸收和容纳外源DNA分子的状态。 13.体外包装：在离体条件下，将提取的包装蛋白与带COS位点的DNA混合，产生噬菌体颗粒的过程。 14.转导（transduction）:通过噬菌体的释放和感染将DNA从一个细胞转移到另一个细胞的过程。 15.核酸分子杂交(nucleic acid hybridization ):用一已知的DNA或RNA片段(探针)来检测样品中未知的核苷酸序列，通过核苷酸间碱基互补的原理互相结合，再经显影或显色的方法，将结合核苷酸序列的位置和大小显示出来。实质是核酸分子的变性与复性过程 16.探针(probe):用来检测某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。 17.Southern印迹杂交:是将经凝胶分离的DNA转移到合适的固相支持物，再通过特异性探针的杂交来检测被转移的DNA片段的一种技术。 18.Northern印迹杂交:将RNA样品变性和通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到NC膜等固相载体上，用标记的DNA或RNA特异探针对固定在膜上的RNA进行杂交。 19.RNA的斑点或狭线杂交（Dot blot or Slot blot）：将少量RNA样品点在Dot和Slot杂交滤器中的NC膜上，滤膜干燥后用32P标记的RNA或DNA探针进行杂交和用X线片进行放射性自显影。较Northern blot省去了电泳和毛细转膜过程. 20.核酸原位杂交:以特异性探针与细菌、细胞或组织切片中的核酸进行杂交并对其进行检测的方法, 又称原位杂交组织化学或杂交组织化学。 21.反转录PCR ( RT-PCR):是将RNA的反转录反应和PCR 反应联合应用的一种技术 22.实时定量PCR技术:是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过外标准对样品中的DNA (or cDNA) 的起始浓度进行定量的方法。 23..表位标签(epitope tag ):亦称附加表位由短肽序列组成的能显示抗体存在的一个表位，广泛用于分子生物学中附加到转基因蛋白中，翻译产物为融合蛋白，通过免疫组化或Western印迹杂交跟踪其表达，不会增加抗体对特异蛋白的反应。表位标签便于目的蛋白的纯化、鉴定。 24.消减杂交法:将实验组mRNA(或cDNA)与对照组cDNA(或mRNA）杂交，去除杂交体和未杂交上的对照组成分（cDNA或mRNA），得到的为实验组独有的mRNA或cDNA，这些基因即是差异表达基因。 25.酶单位：在适当反应条件下，1h内在50μl体系中完全酶解1μg特定DNA底物所需酶量，定为1个活性单位。 26.星活性:酶切反应条件不能满足最适条件,导致某些酶产生第二活性. 27.标准的酶切体系1μgDNA，20μl总反应体积，1U酶，推荐的Buffer和温度，反应1h. 六、外源基因表达、基因差异表达 1.多克隆位点（Multiple Cloning Site，MCS）：提供多个单酶切位点用于克隆操作。 2.启动子（promotor，P）：DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始mRNA合成的序列 3.S-D序列：核糖体结合位点(RBS)。它是AUG和位于其上游3～10bp处的由3 ～9bp碱基序列组成。转译效率严格依赖于：S-D序列以及S-D序列与起始密码AUG之间距离。非融合蛋白表达的关键： SD序列与起始密码AUG之间距离。 4.瞬时转染：外源DNA未与宿主染色体整合，维持时间短(2-3天)。 5.稳定转染：外源DNA已整合入宿主细胞染色体, 其转染的目的是获得稳定表达外源目的基因的单细胞克隆。 6.消减杂交法(subtractive hybridization,SH )： 将实验组mRNA(或cDNA)与对照组cDNA(或mRNA）杂交，去除杂交体和未杂交上的对照组成分（cDNA或mRNA），得到的为实验组独有的mRNA或cDNA，这些基因即是差异表达基因。 7.代表性差异分析技术（RDA）：使用PCR以指数形式扩增双链模板，以线性形式扩增单链模板的特性，通过消减和富集，使得目的基因片段得到特异性扩增。 8.抑制消减杂交法(SSH)：1）用限制性内切酶（Rsa I或Hea III）对双链cDNA消化；2）把Tester cDNA均分为两份 ,分别连接接头；3）两轮消减杂交：与Driver cDNA(过量)杂交，混合后，加入过量的新的变性Driver cDNA作第二轮杂交,补平末端；4）加入引物作2次PCR扩增。 七、基因诊断和治疗、生物芯片 1.:基因芯片技术：用已知序列的探针与样品cDNAs杂交，杂交信号阳性的探针序列即为细胞中表达的DNA序