鲢鱼骨胶原多肽的制备及其抗氧化、钙螯合活性的研究.pdfVIP

摘 要 根据《中国渔业统计年鉴》显示：2018 年淡水养殖产量达到 2959.84 万吨， 比2008 年增长 42.81% 。随着淡水养殖面积和产量不断增大，淡水产品加工业也 随之迅速发展，如鱼糜加工产业，但与此同时，淡水鱼加工业所产生大量的副产 物并没有得到有效利用，资源被浪费，还使加工产品价格较昂贵。鱼骨是鱼糜加 工业的主要副产物之一，含有丰富的蛋白、不饱和脂肪酸、钙、磷等营养成分， 且钙磷比例接近 2:1 ，易被人体吸收，是一种优良的营养食物资源。 为实现资源高值化利用，本着变废为宝、促进淡水渔业可持续发展的理念， 本文以鲢鱼骨为原料，采用酶解技术优化制备胶原多肽，经 Sephadex G-25 分子 层析分离纯化，得到不同分子量多肽组分并分析其氨基酸组成，研究胶原多肽及 其各组分的抗氧化活性、钙离子结合活性，为其应用奠定一定的基础。通过 LC-MS/MS 对最强抗氧化活性、高钙结合活性的组分进行结构鉴定，探究其结构 与抗氧化性、钙离子螯合之间的关系。主要研究结果如下： （1）从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和复合蛋白酶中 筛选对酶解鲢鱼骨粉制备胶原多肽的最优酶，并以胶原多肽得率结合水解度为评 价指标，考察料液比、酶添加量、pH 、酶解温度和酶解时间等因素对最优酶制 备胶原多肽的影响。结果表明：复合蛋白酶的酶活力最高，达到 16.80×104 U/g ， 且在酶活力和酶解时间相同的情况下，复合蛋白酶制备胶原多肽的效率最高，故 确定复合蛋白酶为最优酶。经单因素试验和响应面优化确定复合蛋白酶酶解鲢鱼 骨粉制备胶原多肽的最佳工艺：料液比 1:10 （g:mL ），酶添加量8220 U/g、pH 8 、 酶解温度 51 ℃、酶解时间4.5 h 时，此时的胶原多肽得率为 49.00% 。 （2 ）经 HPSEC 测定酶解液是由 5 种不同分子量的胶原多肽所组成，分子量 主要集中在 246-4183 Da 。经 Sephadex G-25 分离纯化后，胶原多肽及其组分中 的 Gly、Glu、Asp 、Ala 和 Pro 的含量相对较高，氨基酸组成符合胶原蛋白的特 + 征，其抗氧化活性结果表明：胶原多肽及其组分均具有一定的 ABTS ·清除能力 和还原能力，组分 F4 达到最强，其 IC50/OD1.0 值分别为 0.28 mg/mL 和 10.47 mg/mL 。对组分 F4 进行结构鉴定，发现组分 F4 中 WGEP 、WPDA 、GPGPCVW 和 GGPW 具有较高的抗氧化活性，并通过BIOPEP 数据库搜索为新型多肽序列。 （3 ）胶原多肽及其组分的钙结合活性结果显示：胶原多肽及各组分均具有 一定的钙结合活性，组分F3 达到最高，其螯合率、钙质量分数分别为 50.10%和 14.01%。对肽-钙复合物进行结构表征，发现组分 F3 和肽-钙复合物在化学结构上 存在一定差异，分属于不同的物质，说明有新物质的生成。对组分 F3 进行结构 鉴定，以多肽与钙离子螯合能力的关系为导向分析，筛选出 10 条肽具有高钙结 I 合活性，依次为 WGGPP 、WPTP 、YGLP 、WLEE 、YPMP 、QPAGPR、WPGP 、 LPPP 、GPPGYP 和 LPMAGP ，并通过 BIOPEP 数据库搜索为新型多肽序列。 关键词：鲢鱼骨；抗氧化肽；肽-钙复合物；工艺优化；结构鉴定 II Abstract According to the China Fishery Statistical Yearbook, the output of freshwater aquaculture reached 29.5984 million tons in 2018, increasing 42.81% than 2008. With the continuous increase of fre