临床微的生物检验技术进展.ppt

临床生物病原体的快速诊断 虽然对“快速”的肘问长短没有正式的定义 ,但是大多數人期望快速的糸统能在4h内提 供可用的结果。通常微生物的繁殖附间(通 是30min或更长附间)不允许那些依赖微 生物生长与否的检测方法,在短射间内产生 可检测的生化反应。为了克服这一问题,必 然使用全新的底物,检测待测菌产生的酶或 蛋白质,从而在1~4h内检测出应答反应  (一)细黄与真菌的快速诊断 1、质谱技术 传统的形态学检测技术 经典的利用酶学的生化反应技术 生化反应 编码技术 碳指紋技术 质谱技术(MALD|- TOF MS  Bruker Daltonik, microflex Biotyper( Billerica, MA, USA) bioMerieux Vitek Ms(Durham, NC, USA) the Andromas sAs(Paris, France) The former two instruments are available in the usa and received clearance from the Food and Drug Administration(FDA)for certain groups of microorganisms  Ruler Daltron cs Bruker Microflex bioMerieux Vitek Ms VITEK MS  1, radiation 3. Desolvation 0● lonization 0自o 0● Oooo ooo Desorption Target plate Charged grid Data processing potted with protein of interest Matrx  (1)在需氧/兼性厌氧的革兰阳性杆黄应用 榫杄菌属菌可准确鉴定。 MALDITOF MS可以鉴定分枝杆菌,这种检测 需要特殊处理以杀天待测菌(出于安全等考 虑)、打散细胞聚团块以及裂解细胞外壁 envelopes)等。 MALDITOF MS应该能够 鉴定大多数临床相关的分枚杆菌菌种。  (2)在需氧/兼性厌氧的革兰阳性赇菌应用 MALD| TOF MS对葡萄赇茵( Staphylococci )、β-蹿血性链球菌(b- hemo/yti streptococci、气球菌( Aerocool和肠赇菌 Eη terococc)的整体鉴定性能都是极佳的。而 对一些-蹿血性链赇菌(a-hemo/yti streptoco)有因唯。  布鲁克糸统可能难以区分缓症链赇菌(S.mit)、口腔 链球黄(5.Oral/)与肺爽链慼菌(5Speu∥ moniae);而 VITEK MS条统则可以克服这一局限。尽MALD| TOF MS在种群水平上能够可靠地鉴别草绿色镟球菌 ( viridans group streptoco),但它可能无渎区分一 些密切相头的种。其宅链赇菌,如乳链赇蔺(S.cani 停乳链赇菌伴乳亚种( S dysgalactiae、化脓性链赇 蔺(S.Pyo8ene和 Sinfantarius、马肠謎球蓢(S. equnnnu和 S. utetiensi等,被此可能无法很好地区分 开来。  (3)在需氧/兼性厌氧的革兰阴性杆蔺应用 阴沟肠杆菌复合体 植生拉乌尔菌、解鸟氣畈拉乌尔蔺 巴羕尔弓形杆菌 穹曲杆黄种 小肠结肠炎耶尔菌 二氧化碳嗜纤维蔺 洋葱伯克霍尔德蔺 气草胞菌 HACEK黄群  沙门黄属内鉴定遁常是不可行的,但是宅可区分 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhifo 其乞 S enterica serovars Shigella and E coli are so closely related that Shigella is not identified by MALDl-TOF MS To differentiate, colonies should be examined for lactose fermentation, motility and a spot indole. If positive an identification of E collis appropriate If negative for these tests, Shigella should be suspected and an agglutination with Shigella antisera perfor