生物制药工艺技术 固定化酶与固定化细胞 固定化酶与固定化细胞.pptVIP

学习情境 3微生物酶发酵制药技术 固定化酶与固定化细胞 固定化酶：是被固定在某一有限空间内不再能自 由流动而仍有催化活性的酶。 优点： 不溶于水，易于与产物分离； 可反复使用，反应易于控制； 可连续化生产； 稳定性好。 缺点： 固定化过程中往往会引起酶的失活。 增加了生产的成本 只能用于水溶性底物，而且较适用于小分子底物 胞内酶必须经过酶的分离纯化过程 不适宜用于多酶反应 ⒊酶和细胞固定化方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） 酶和细胞固定化模式 ①物理吸附法 使用对酶蛋白有高度吸附能力的硅胶、活性炭，氧化铝、高岭土、石英沙、火棉胶、多孔玻璃等在一定条件下与水溶酶作用制得。 这些具有吸附能力的物质就叫做载体。 优点：操作简单，反应条件温和，酶活力损失少，载体可反复使用。 缺点：易引起蛋白质表面变性，且由于结合力 弱，当反应液的pH值、离子强度、温度、底物浓度等发生变化时，会导致酶易从载体上部分或全部脱落。 ②离子结合法 利用含有离子交换基团的固相载体（如具有交换基团的葡聚糖凝胶或纤维素）与酶蛋白分子的带电基团互相吸引（靠离子链）而形成络合物。 第一个离子结合法固定化酶： DEAE — Cellulose 固定化过氧化氢酶 第一个工业化的固定化酶： DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶 ③共价结合法 酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接。一般在温和条件下能参与偶联的蛋白质基团包括：游离羧基（包括肽链C-末端的α-羧基等）、游离氨基（如肽链N-末端的α-氨基）等。 优点：此法制得的固定化酶，酶分子和载体间的 共价键较牢固，在介质组成发生改变和进行反应 时，都不会造成酶的脱落，因而可以反复使用。 缺点：制取固定酶较复杂，反应条件比较剧烈， 所以要制得酶活力很高的固定化酶较为困难。 制作方法：有重氮化法、烷基化和芳基化法、肽 法和戊二醛法等。 优点：利用此法制得的固定化酶，由于酶分子仅仅是被包埋起来，而未受到化学作用。酶蛋白几乎不起变化，可适用与多种不溶酶的制备。 缺点：酶被包埋在内部，对大分子底物很难发生催化作用。所以用包埋法制备的酶，一般只适用与小分子底物。 二、固定化细胞 1.定义：将细胞限制或定位于特定空间位置的方法。 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。 2.固定化细胞的特点 优点（1）无需进行酶的分离纯化 （2）细胞保持酶的原始状态，固定化过程中酶可回收； （3）细胞内酶比固定化酶稳定性更高； （4）细胞内酶的辅因子可再生； （5）细胞本身含多酶体系，可催化一系列反应； （6）抗污染能力强。 缺点（1）利用的仅是胞内酶； （2）细胞膜、细胞壁和载体都存在扩散限制作用； （3）载体形成的孔隙影响高分子底物的通透性。 谢 谢！ * * 项目 2 合成原理 一、什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 固定化技术 水不溶性酶 （固定化酶） （1）载体结合法 酶被吸附于惰性的固相载体或离子交换剂。根据 酶分子与载体吸附的性质有物理吸附、离子吸附 和共价结合三种。 优点：制作简单，处理条件缓和，酶蛋白的活性中心和高级结构破坏较少，可以制得活力较高的固定化酶。 缺点：离子键结合较松散，如在高离子强度下进行反应时，酶与载体易分开。 （2）交联法 依靠双功能基团的试剂，使酶蛋白分子之间发生交联，凝集成网状结构而成为固定化酶，最常用的双功能试剂有戊二醛、顺丁稀二酸酐和乙烯共聚物等。那么酶蛋白中的游离氨基、酚基、咪唑基及巯基均可参与交连反应。 双功能试剂： 常用的是戊二醛 O O H — C — CH2 — CH2 — CH2 — C — H 使用戊二醛的酶固定化的交联方式： 酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价结合酶分子； (a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被结合到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶 （3）包埋法 将酶包埋在凝胶的微小空格内或埋于半透膜的微 型胶束内，但底物仍能渗入到里面与酶接触。 ①微胶囊包埋法 将酶包埋在半