生物制药技术 种子制备 种子的制备.pptxVIP

生物制药技术种子扩大培养主讲人：苏艳任务一、种子扩大培养的目的和任务任务二、种子的制备任务三、影响种子质量的因素目录 任务二 种子的制备种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段 一、实验室种子的制备实验室种子的制备一般采用两种方式 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基或斜面（静置培养）培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌。 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法(通过摇瓶培养提供比较好的溶氧）。 1、孢子的制备（1）细菌孢子的制备细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰富的配方。培养温度一般为37?C。细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽孢的细菌培养则需要5~10天。（2）霉菌孢子的制备 霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。 培养的温度一般为25~28?C。 培养时间一般为4~14天。（3）放线菌孢子的制备 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。 培养温度一般为28?C。 培养时间为5~14天。2、液体种子制备（1）好氧培养 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌（S. griseus）、产卡那霉素的卡那链霉菌（S. Kanamuceticus）可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体（短菌丝），作为种子。 试管→三角瓶→摇床→种子罐 （2）厌氧培养 对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等） 试管→三角瓶→卡式罐→种子罐 二、生产车间种子制备 实验室制备的孢子或液体种子移种至种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝）体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。 种子罐培养基：种子罐中应采用易被微生物吸收利用的成分为主，同时供给足够的无菌空气，最后一级种子罐培养基还应与发酵罐培养基基本一致接种：孢子悬浮液采用微孔接种法，摇瓶菌丝体采用火焰保护接种或者压差法，种子罐之间采用压差法接种从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种从种子罐接种微孔压差法接种针 （含菌悬液或孢子悬液）插入，压力由 0.5－0.6kg/cm 2降至0.2kg/cm 2 ，当针插入橡皮塞后，茄子瓶与发酵罐压力平衡，降低罐压，使悬液注入。 特点：操作方便，不易染菌，但不宜于菌丝体种子的接种。 1、种子罐的作用 主要是使孢子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。2、种子罐级数的确定 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数。 生产上只有一级发酵不合算，故生产上至少要用二级发酵，但种子罐级数多，则设备多，污染的机会也多，工艺就复杂了，故也不可太多级种子罐（实验室用一级发酵）。种子罐级数取决于：菌种生长特性:孢子发芽及菌体繁殖速度； 如生长繁殖快，孢子多，发芽率高，则级数少所采用发酵罐的容积另外还与种子罐与发酵罐的容积比等有关。 V发酵罐/V种子罐:比数越大，种子级数越大。细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27?C, 40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（ 27?C, 10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 （二级发酵）。确定种子罐级数需注意的问题种子级数越少越好，可简化工艺和控制，减少染菌机会种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的生产率，增加染菌机会虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速孢子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。 谢谢聆听THANK YOU FOR YOUR ATTENTION生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基（培养基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋白胨，10克葡萄糖和20克琼脂与升水中）的斜面上，于4℃冰箱内保藏。每年移种3-4次。将保存的酵母菌种接入含10ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2-3天后，再扩大至含有250-500ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2天后，移种至含有5-10L麦芽汁的卡氏培养罐中，于15-20℃培养3-5天即可作100L麦芽汁的发酵罐种子