生化分离与纯化技术 实训项目 酪蛋白和乳蛋白素的制备.ppt

酪蛋白和乳蛋白素的制备 酪蛋白和乳蛋白素的制备 酪蛋白和乳蛋白素的制备 产品简介 一、酪蛋白简介 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，占乳蛋白的80%~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电和为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调到pH4.6，酪蛋白就可从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂志除去。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 产品简介 二、酪蛋白素简介 乳蛋白素（α-lactalbumin）广泛存在于乳品中，是乳糖合成所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（casein），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出。而乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用这一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用从酪蛋白粗制剂中出去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质可随澄清液除去。再经过一次pH沉淀后，即可得到粗乳蛋白素。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 实训目标 掌握盐析法和等电点沉淀法的原理和基本操作。 盐析法 酪蛋白和乳蛋白素的制备 实训原理 乳蛋白素（α-lactalbumin）广泛存在于乳品中，是乳糖合成所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（casein），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出。而乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用这一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用从酪蛋白粗制剂中出去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质可随澄清液除去。再经过一次pH沉淀后，即可得到粗乳蛋白素。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 实训试剂与设备 一、试剂和材料 脱脂或低脂奶粉，无水硫酸钠，0.1mol/LHCl，0.1mol/LNaOH，0.05mol/L碳酸氢铵，滤纸，pH试纸，浓盐酸，0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH为4.6)，乙醇。 二、实验器材 烧杯（250mL、100mL、50mL），玻璃试管（10mm×100mm），离心管（50mL），磁力搅拌器，pH计，离心机。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 生产实训 一、生产前准备 1、检查生产原料、各种生产用试剂； 2、检查生产设备； 3、检查生产记录等文件。 二、生产操作 1、盐析法制备酪蛋白 （1）将50mL牛乳倒入250mL烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。 （2）在搅拌下缓慢加入10g无水硫酸钠（约10min内分次加入），之后再继续搅拌10min。 （3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。将上述沉淀悬浮于30mL乙醇中，倾于布式漏斗中，过滤出去乙醇，抽干。将沉淀从布式漏斗中已出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到酪蛋白。准确秤量。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 生产实训 2、等电点沉淀法制备酪蛋白素 （1）将盐析法制备酪蛋白滤液置于100mL烧杯中，一边搅拌，一边用pH计以浓盐酸调整pH至3.0±0.1。 （2）设定离心机转速为6000r/min，离心15min，倒掉上清液。 （3）在离心管内加入10mL去离子水，震荡，使管内下层物重心悬浮，用0.1mol/LNaOH溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。 （4）设定离心机转速为6000r/min离心10min，将上清液倒入50mL烧杯中。 （5）将烧杯置于磁力搅拌器上，一边搅拌，一边利用pH计用0.1mol/LHCl调整pH至3.0±0.1。 （6）设定离心机转速为6000r/min离心10min，倒掉上清液。沉淀取出干燥，并秤量。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 产品检测 一、检测原理 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度（比Lowry法灵敏4倍） 在一定范围内，蛋白质和染料考马斯亮蓝结合符合比尔定律，因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。 酪蛋白和乳蛋白素的制备 产品检测 二、实验试剂与器材 1、检测试剂 0.9