流式淋巴细胞亚检测技术原理.pptVIP

淋巴细胞亚群检测  目录 淋巴细胞的分类 淋巴细胞亚群检测方法 淋巴细胞亚群检测原理 淋巴细胞亚群的免疫功能 淋巴细胞亚群的临床意义  淋巴细胞的分类 ★ ★ 细胞免疫 ★体液免疫 固有免疫 T淋巴细 B淋巴细胞 NK细胞 淋巴细胞占外周血白细胞总数的20%-40%  检测方法 8采用流式细胞术(FCM) 8是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个 细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量分析和分 选的技术  FCM 8检测对象:单细胞悬液或生物颗粒; 8检测参数:多参数; 8检测特点:单细胞水平分析; 8检测速度:高速,最高达上万个细胞/秒 8检测结果:精度高、准确性好 8可对目标细胞进行分选;  检测原理 免疫荧光染色主要有两种方法。间接标记的方法难以进 行多色标记,而且操作复杂,所以一般首选直接荧光染 荧光抗体 第一抗体 荧光二抗 直接标记 间接标记  常用荧光素 8499m蓝色荧光(Blue) 8500-549nm,绿色荧光( Green) 8550-584mm,黄色荧光(Ye1low) 8585-615mm,橙色荧光( Orange) 8616-700mm,红色荧光(Red) 700n,远红外荧光(Far-Red)  常用荧光素 荧光素分子 发光波长 发射光波长 中文名 FITC 异硫氰酸荧光素 藻红蛋白 Perci 多甲藻叶绿素蛋白 别藻青蛋白 PE-Cy5 670 藻红蛋白花青素5 PE 藻红蛋白花青素7  免疫荧光染色 FCM可检测下列细胞成分 表面标记物 胞浆标记物 分泌到胞外的 核内抗原 °细胞因子 核内标记物 可溶性成分 细胞因子 核酸含量 黏附因子 胞内抗原 表面受体  联合CD45的四色方案 8第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记,主要可以检测 T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群 8 CD45-FITC B CD4-RDl 8 CD8-ECD g CD3-PC5