流式细胞原理介绍.pptVIP

中流式细胞仪的原理及应用 马黎明 生命科学与技术学院  流式细胞术的基本概念 流式细胞术 flow cytometry,FCM)是以 流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精 确的对单个细胞理化特性(如大小、内部 结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等)进行 多参数定量分析和分选的新技术。  流式细胞术的特点 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞 及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状 态下,通过荧光探针的协助,从分子水平上 获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分 选 细胞不被破坏,测量快速、大量、准确、灵敏、定量  流式细胞仪的基本概念 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强 度的细胞分析仪,是集激光技术、电子物理技 术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧 光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新 型高科技仪器。  BD FACSCanto流式细胞分析仪  流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞功能 细胞大小 细胞表面/胞浆/核的特异 性抗原 细胞颗粒度 细胞活性 DNA含量与细胞周期 细胞内/外的细胞因子 RNA含量 激素结合位点 蛋白质含量 细胞受体 钙离子浓度 线粒体膜电位  流式细胞仪的工作原理 ■采用激光作为激发光源,保证其具有更好的单色性与 激发效率; 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术,保 证检测的灵敏度和特异性; 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个 参数信号进行数据处理分析,保证了检测速度与统计 分析精确性。  1.流式细胞仪的基本结构 (1)液流系统 (2)光学系统 (3)数据处理系统  (1)液流系统 由样本和鞘液组成 ■待测细胞→单个细胞的悬液 荧光染料标 记的单抗对其染色受清洁气体压力 从样 品管进入流动室形成样本流 ■鞘液:辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是 包裏样本流的周围,保持样本流中细胞处于喷嘴中心 位置,防止其靠近孔壁而阻塞喷孔  液流系统示意图 荧光信号 鞘液