Punctin-2多克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

Punctin-2 多克隆抗体的制备与鉴定 摘 要 Punctin-2 又被称为ADAMTSL-3 (a disintegrin-like and metalloprotease domain with thrombospondin type I motifs-like-3)，是ADAMTS 蛋白超家族中的亚家族ADAMTSL 的 成员。ADAMTS 蛋白酶家族存在具有催化活性的金属蛋白酶结构域和结合活性辅助结构 域，ADAMTSL 成员仅具有提供结合活性的辅助结构域，不存在金属蛋白酶结构域。 Punctin-2 是一种分泌型的糖蛋白，主要位于细胞外基质（ECM ）中，在人体的组织中广 泛存在。研究发现，骨骼中punctin-2 的表达与身高有密切联系。同时，在结肠癌中发现 punctin-2 的突变，可能与癌症的发生存在一定的关系。在线虫的运动神经元中，madd-4 通过影响乙酰胆碱受体（AChR ）和GABA 受体（GABARs ）在突触后的定位来使运动 神经元处于兴奋和抑制的状态。 我们知道madd4 在线虫运动神经元的功能, 进而想探究punctin-2 在哺乳动物神经系 统中发挥的功能。目前还没有行之有效的 punctin-2 的抗体，所以这里我们自己制备 punctin-2 的抗体，来便于研究punctin-2 在大脑中的作用。通过对鼠Punctin-2 的氨基酸 序列进行分析，选取三条抗原多肽进行合成与偶联，免疫新西兰白兔获取血清和纯化抗 体，使用亲和纯化的方法对抗血清纯化得到抗体，通过ELISA 、WB 和Co-IP 实验对所 得的抗血清和纯化所得抗体进行相关的检测与鉴定。 关键词：Punctin-2 ；多克隆抗体；抗原多肽；兔 II 工程硕士学位论文 Abstract Punctin-2, also known as ADAMTSL-3 (a disintegrin-like and metalloprotease domain with thrombospondin type I motifs-like-3), is a member of the subfamily ADAMTSL in the ADAMTS protein superfamily. ADAMTS protease family has catalytic activity of metalloproteinases and binding activity of the auxiliary domain, ADAMTSL members have only provide binding activity of the auxiliary domain, there is no domain of metalloproteinases. Punctin-2 is a secretory glycoprotein in the extracellular matrix (ECM)，and widely exists in human tissues.The study found that the expression of punctin-2 in bone is closely related to height. At the same time, the mutation of punctin-2 found in colon cancer may be related to the occurrence of cancer. In C.elegans motoneurons, madd-4 causes motoneurons to be excited and inhibited by affecting the postsynaptic localization of ace