Q烟粉虱气味结合蛋白（OBPs）与番茄褪绿病毒（ToCV）的互作研究.pdfVIP

Q OBPs ToCV 烟粉虱气味结合蛋白 （ ）与番茄褪绿病毒 （ ）的互作研究 摘 要 番茄褪绿病毒 （Tomato chlorosis virus, ToCV ）在我 国以 Q 烟粉虱 （Bemisia tabaci）为主要传播介体，通过半持久非循环的方式传播，分 布范围广泛，对蔬菜作物和园艺观赏植物造成了严重的危害和经济损失。 监测 ToCV 的发生与扩散对及时发现 ToCV 并采取相应预防措施有重要意 义。气味结合蛋 白 （Odorant-binding proteins, OBPs）作为运输气味分子 的载体，在 昆虫与寄主植物的交流过程中，对嗅觉信号分子——植物挥发 性化合物的识别具有至关重要的作用。研究 OBPs 在烟粉虱选择健康 感/ 病植株的过程中的作用，能够为烟粉虱及其传播的 ToCV 的综合防治提供 理论依据。本研究采用 RT-PCR 对湖南省蔬菜研究所基地的茄科蔬菜的 ToCV 和烟粉虱发生情况进行监测和检验，研究了烟粉虱 OBPs 与 ToCV 的互作机制。 主要结果如下： 1、对湖南省蔬菜研究所基地采集的疑似感染 ToCV 的番茄、茄子、 辣椒和马铃薯四种茄科蔬菜各 20 份样品通过 RT-PCR 进行 ToCV 检测。 RT-PCR 扩增产物经纯化 回收测序 比对后 ，结果显示样 品与北京番茄 ToCV 分离物 （KC887999.1）部分序列相似度较高，达到 99.0 %。其中番 茄、茄子、辣椒和马铃薯样品的 ToCV 感染率分别为 100 %、80 %、85 % 和 70 %。对这四种病症蔬菜叶背面的烟粉虱进行 ToCV RT-PCR 检测，并 鉴定其生物型。结果显示烟粉虱携带有 ToCV，带毒率不低于 87.5 %，且 生物类型鉴定为 Q 烟粉虱。 2 RT-qPCR Q ToCV 、采用 检测 烟粉虱取食感染 的番茄植株不同时间 （24 h，48 h，72 h 和 96 h）后体内相关 OBPs 基因的相对表达水平，以 Q 烟粉虱取食健康的番茄植株作为对照。结果显示 OBP3 基因的相对表达 水平与烟粉虱在获毒过程中其体 内病毒量的变化趋势一致，即随着取食 时间的增加，呈现先上升后下降的趋势，在 48 h 时达到最大。 I 硕士学位论文 3、对 Q 烟粉虱 RNA 干扰 （RNA interference, RNAi ）的条件进行优 RNAi 2 化。结果显示采用人工饲喂的方法进行 时，饲喂 天后烟粉虱的存 活率较高。 4 、采用 RNAi 技术特异性沉默 Q 烟粉虱体 内 OBP3 的表达 ，通过 RT-qPCR 分析 RNAi 效率与其他相关 OBPs 的相对表达水平。结果显示， 通过 RNAi 2 d 后 OBP3 的表达降低至 27.1 %，RNAi 效果较好；OBP3 的 Q OBPs OBP1 表达被沉默后， 烟粉虱体内部分 的表达水平发生变化，其中 和 OBP2 的相对表达水平显著上调，OBP5 和 OBP6 显著下调，OBP4 和 OBP7 OBP3 Q / 没有明显变化。同时， 的表达被干扰后， 烟粉虱对健康 感 染 ToCV 的植株的选择性也发生了变化：不携带 ToCV 的 Q 烟粉虱趋向于 取食选择健康的植株，而携带 ToCV 的 Q 烟粉虱对健康/感染 ToCV 的植 株没有明显的取食趋向性。 关键词 ：