第二章dna重组克隆的单元操作--酶.pptx

第二节 工具酶 ;;（一）基本知识;;RE将侵入细菌体内的外源DNA切成小片断。;细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护，不能被自身的限制性内切酶识别切割。;3.性质:内切酶,在核酸分子链的内部制造切口的酶。;4.功能:自我保护作用;I 型限制性内切酶 ;首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B株和 K株分离的。;（2）识别位点序列;需ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。;类型Ⅰ：大型的多亚基的蛋白质。 具有内切酶的活性、 具有甲基活性化酶的活性。 具限制和修饰两种体系， 切割位点基本上是随机。 因此Ⅰ型内切酶在DNA重组研究工作中并没有什实际用处。 ;首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离出来。;（2）识别位点序列;EcoR I 5’-G?AATTC-3’ 3’-CTTAA?G-5’ Pst I 5’-CTGCA?G-3’ 3’-G?ACGTC-5’ 产生粘性末端;（4）粘性末端;;①连接便利;;③ 补平成平齐末端;识别位点和切点完全相同称同裂酶。 ;Xma I 5’-C?CCGGG -3’