活性干的酵母生产.pptVIP

活性干酵母的生产 本实验包括两大部分内容: A、酵母细胞的培养 B、酵母细胞的真空干燥 A、酵母细胞培养实验 、实验目的 要求学生掌握通风发酵的基本原理及过程,掌握 上罐操作技术,掌握流加补料控制技术 ·(1)发酵罐及管路、空气过滤器灭菌操作及发酵 罐系统管路的熟悉。 (2)实罐灭菌一培养基灭菌实验。 ·(3)观察并记录酵母菌扩培过程及上罐发酵过程 菌种生长变化情况。 实验原理 面包酵母培养是最典型的细胞物质生产过程。利 用葡萄糖为碳源,通风培养面包酵母,每200g碳 水化合物约可得到100g干酵母。即得率约为50%。 ·在通风供氧充足的前提下,分批补料(流加)培 养。本实验面包酵母培养的目的是获得最大酵母 浓度。因此采用流加培养较为理想。其原理是所 谓的反巴斯德效应( CRABTREE效应):在酵母 培养过程中,糖浓度过高时,即使溶解氧很充足 但由于糖生成乙醇,从而使菌体得率下的现象 (1)分批培养 ·分批培养是微生物在特定条件下只完成一个生长周期 ( growth cycle)的方法,即接种少量微生物在一密闭系 统中生长繁殖,直到某些营养物耗尽或某些产物积聚到毒 害浓度为止。生长中微生物群体所经历的几个生长阶段分 别为迟滞期( lag phase),对数生长期( exponential phase),稳定期( stationary phase),死亡期 ( deathphase)。 还潜生长期 (2)分批补料培养(Fed- batch culture) 分批补料培养是 Yoshida等(1973)创用的,是指分批 培养过程中连续地补加培养基,而不从发酵器中间断地 放出培养液。这样培养液的体积随着时间延长而增加。 分批补料培养是分批培养和连续之间的一种过渡培养方 式,兼有两者的优点又可克服它们的缺点,因此在发酵 工业中被广泛运用。 分批补料培养中当达到最大菌体浓度时开始补加培养基 且流加培养基速率与底物被消耗速率相等,虽然菌体总 数在不断增加,而细胞浓度仍为一个常数,和状态被 称为半稳态或准稳态( Quasistady stale) 当以恒速流加培养基达到准稳态时: 稀释率D=F/(Vo+Ft)D随时间而下降。 uXv= d(xv) 生长比速率(h1)u=dt:!D=FV+Ft 补料液浓度moL)SF=XYxs 补料速度(L/h)F=Vv 式中:x为菌体浓度(L)·Y为基质对菌体专化率 (g/mo),一般以葡萄糖为基质酵母瑨养时Ys约为 90g/mol。 B上述的恒速流加在一些次级代谢产物的生产中 可以用到,但在以菌体为目的的培养就不适用了。 当培养目的为获得菌体时,并要使限制性底物的 浓度保持一定浓度,且菌体的比生长速率保持恒 定,必须采用变速流加的方法,加料速度随时间 指数增长 理想的变速流加时体积与补料速度变化为 醪液体积V=Veμt 补料速度F=μVoe 所谓 Crabtree效应即 Crabtree(1929)发现,面 包酵母的呼吸活力对游离的葡萄糖十分敏感,当 其浓度在5μg/L时即出现阻遏作用。为获得最大 酵母得率,不能用恒速流加的方法,而保持最大 生长速率的变速流加法只是理想状态。现今酵母 的分批补料发酵的生产所采有用的方法是以自动 测定发酵器的排气中的微量乙醇含量来严格控制 糖补入量,这样,得到的菌体量接近理论得率。 实验仪器、设备和材料 ·10升发酵罐(pH仪,培养液及酸碱液流加 装置,蠕动泵),1台; ·摇床,超净工作台,离心机,显微镜,分 光光度计,三角瓶,面包酵母菌种,淀粉 水解糖液、尿素等原料。