结核分枝杆菌效应T细胞检测试剂盒上海铭源数康生物芯片有限公司.docVIP

结核分枝杆菌效应 T 细胞检测试剂盒（酶联免疫斑点法）说明书 【产品名称】 通用名称：结核分枝杆菌效应 T 细胞检测试剂盒（酶联免疫斑点法） 英文名称： Diagnostic Kit for effector T cell to Mycobacterium tuberculosis （enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT ） 商品名称： FS-Spot 【包装规格】 32 人份/盒 【预期用途】 本产品采用酶联免疫斑点（ ELISPOT ）法检测并计数人新鲜外周静脉抗凝血分离所得淋巴细胞中 结核特异抗原刺激活化的效应 T细胞，适用于临床疑似结核病的辅助诊断。 细胞免疫是结核菌感染后机体的主要免疫形式。 人体内的 T细胞受结核抗原刺激致敏， 形成活化的 效应T细胞，结核病患者外周静脉血中存在结核分枝杆菌特异的效应 T细胞。这些 T细胞在体外受到结 核分枝杆菌特异性抗原刺激后可分泌细胞因子 γ干扰素（ Interferon ，γIFN- γ）。 结核菌素试验仍是国内临床上诊断结核病的常用手段， 以PPD试验为主； ELISPOT 试验和 γ-干扰素 检测是目前最新的产品形式， ELISPOT 技术因具有灵敏度高、单细胞水平，活细胞功能检测、操作简 便经济，可以进行高通量筛选的优点而迅速被用于免疫学检测领域。 【检测原理】 从全血中分离出来的 T 细胞，经过洗涤排除本底干扰并通过计数保证标准数量的待测细胞，在体 外培养过程中受包含 ESAT-6 和 CFP 10 两个特异性片段的重组融合抗原刺激后分泌 IFN- γ。ELISPOT 检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子 IFN- γ扩散稀释前，直接被反应板上预包被的高亲和力、 高特异性的 IFN- γ单抗捕获， 通过加入生物素标记的抗体结合 IFN-γ的不同抗原决定簇， 并且通过碱性 磷酸酶标记的链亲和素结合生物素进行一步放大作用， 显色底物溶液在原位被酶分解形成深蓝色斑点。 每一个斑点代表一个 γ干扰素分泌细胞（结核特异的效应 T 细胞）。通过对斑点计数可以判断体内是 否存在对结核杆菌敏感的效应 T 细胞。 本产品选用的结核分枝杆菌特异性刺激抗原为基因工程重组 ESAT-6 -CFP10 融合抗原，该抗原在 在卡介苗菌株及大部分环境分枝杆菌中缺失， 因此不受卡介苗接种和大部分环境分支杆菌感染的影响。 但据文献报道当感染 堪萨斯分枝杆菌 (M.kansasii) ，苏尔加分枝杆菌 (M.szulgai) ，海氏分枝杆菌 (M.marinum) 戈登分枝杆菌 (M.gordonae)时，用本产品同类试剂盒检测有可能存在交叉影响。但是在国 内鉴别诊断为这些分枝杆菌感染的病例极少，很难获得相关病例。本产品检测样本要求为新鲜外周静 脉抗凝血，不能长时间保存，因而本产品未作此类分杆菌交叉影响的研究。 【主要组成成份】 1、本试剂盒提供的材料 1、反应板 96 孔 由 12×8 孔板条组成， 32 人份/盒，包被有小鼠抗人 γ-干扰素单抗 2、特异性刺激抗原 1.8ml ×1 瓶 主要成分为结核特异重组抗原，血清白蛋白和抑菌剂 3、阳性对照刺激物 1.8ml ×1 瓶 主要组分为植物血凝素 PHA ，血清白蛋白和抑菌剂 4、浓缩标记抗体 60μl ×1 管 含有生物素标记的小鼠抗人 γ-干扰素单抗 5、浓缩酶结合物 60μl ×1 管 含有碱性磷酸酶标记的链亲和素 6、浓缩洗涤液 50ml ×1 瓶 主要成分为磷酸盐缓冲液、表面活性剂 7、显色液 6.0ml ×1 瓶 含 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸（ BCIP ）和氯化硝基四氮唑蓝（ NBT ） 2、不同批号的试剂盒组分不得混用或互换。 3、本试剂盒未提供但实验所需的设备及材料 上海铭源数康生物芯片有限公司 7-1 II 级生物安全柜（推荐）或洁净工作台 淋巴细胞分离：人淋巴细胞（ PBMC ）分离液（推荐使用 GE 的 Ficoll-PaqueTM Plus）或者淋巴细胞分 离采血管（推荐使用 BD 的 CPT 管） 水平离心机：离心力能达到 1600g，温控（ 18℃-25℃） PBMCs 计数设备和试剂：使用血球计数板及台盼兰在显微镜下计数或者全自动血细胞计数仪 细胞培养箱： 37℃±1℃，5%CO2 洗板设备：合适的自动洗板机或者手动洗板 放大镜（ 10 倍） 移液器及消毒的加样吸头、 EP 管 无菌的细胞培养基：细胞培养基（ RPMI-1640 ）、无血清培养基（ AIM-V ） PBS 缓冲液（ pH7.4） 双蒸水或去离子水 【适用仪器】 校正视力目测或放大镜（ 10 倍）条件下目测。 【储存条件及有效期】 2~8℃冷藏保存，有效期为 12 个月。开封后各组分需在 2 个月内使用完