多糖含量测定方法.docxVIP

多糖含虽的测定 粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨 酸（DN$法测定，多糖含量=总糖-还原糖。 1、总糖含量测定 实验原理： 多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙 黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。 试剂： 浓硫酸（分析纯）、5妹酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。 操作步骤： 制作标准曲线：准确称取105 C烘十至恒重的葡萄糖 50mg于500ml容 量瓶中配成0.1 mg/ml的标准溶液，用蒸僻水分别配成 0、0.02、0.04、0.06、 0.08、0.1 mg/mlo 1 ml标准液分别加入5%苯酚溶液1 ml,并迅速加入浓硫酸 5 ml ,静置10 min。摇匀，30 C放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖 含量为横坐标，ODfi为纵坐标，制作得到标准曲线。 样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定 OD490并 代入标准曲线计算样品的总糖含量。 2、还原糖含量 实验原理 碱性条件下，DNSM与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。此物质在煮 沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。 据此可 通过测定OD?确定还原糖含量。 试剂及配制： 浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量 蒸僻水中并