细胞迁移与侵袭实验技术详解.pptVIP

肿瘤细孢坛动实验技术 肿瘤细胞生物学实验室张宁P组 肿瘤细胞运动 体内实验: 体外实验 皮下移植瘤模型 原位移植瘤模型 划痕实验 侵袭实验 肿瘤细胞运动 常用研究方法 趋化运动 划痕实验(伤口愈合实验, Scratch Assay) 实验原理 细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法 之一。在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后 在加入药物等实验条件下观察其对肿瘤细胞迁移的 影响。 操作步骤 1.先用 marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横 线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过3条 线 操作步骤 2.在孔中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞种类不 同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%; 3用1oμtip枪头用力均匀地在培养皿中划痕,PBS洗涤2 次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。 操作步骤 4.放入37℃5%C02培养箱培养。每3h测量一次细胞运 动的距离,拍照(具体时间依实验需要而定)。 control 24h 48h 操作步骤 5.数据处理:每个时间点的距离长度0时距离=每个时间长度 细胞整体迁移的距离,求出均数和标准差,时间为横轴,迁 移距离为纵轴(单位mm)作图,并比较初始0时与实验结束 时实验组与对照组的照片。 注冠事项 1.在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细 胞,影响实验拍照结果。 2.一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(2%)否则细胞增殖就 不能忽略。 3按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为 固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。 4.实验时应注意细胞生长状况,选择适当的细胞接种浓度。对不同 的细胞要观察细胞的贴壁率等,确定实验时细胞的接种数量和培 养时间,保证培养终止时密度适当。 实验结果举例 scr/LN-229 siPKCOLN-229 scr/LN-229 86420 24h