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第四章细胞融合 第一节细胞融合概述 1、定义:指用自 然或人工方法 将两个不同来源 的原生质体相融 合并使之分化再 生形成新品种的 技术,又称为体 细胞杂交 2、细胞融合研究进展 ◆ Muller于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发 地融合产生多核的肿瘤细胞 ◆ Lange于1875年第一个观察到脊椎动物(蛙类)的血液细 胞发生融合的过程。 ◆1958年日本学者冈田(0kada)发现仙台病毒具有触发动 物细胞融合的效应。 ◆1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇(PEG)化 学融合法。 ◆1975年 Kohler和 milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞 和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 ◆20世纪80年代出现了电融合技术 几种细胞融合成功的例子 生物种类 细胞来源 成功年代 烟草两个种间 苷蓝—青菜 叶——根 大豆——马唐草 愈伤组织 大麦——花生 种子——种子 叶——悬浮细胞 小麦——矮牵牛 油菜——大 叶——悬浮细胞 悬浮细胞——悬浮细胞 大麦—蚕 大豆——草香木犀 悬浮细胞—叶 酵母菌——鸡 原生质体—血红细胞 大豆——烟草 悬浮细胞——叶 大豆——秋水仙 悬浮细胞 人—胡萝 腹水癌细胞——原生质体 番茄——马铃薯 叶——根尖 1972 人—一小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1972 2003年12月30日,在“神 舟”四号飞船上,我国首次 进行了空间细胞电融合实验 太空融合细胞,在太空遨游 6天又18小时后,于今年1月 6日随返回舱返回地面。5个 月后,原本肉眼看不见的太 空融合细胞,经过不断分裂 繁殖,已经茁壮成长为愈伤 组织。太空融合细胞是由黄 花烟草与革新一号烟草的叶 肉细胞,在太空微重力环境 中通过电融合的方法诱导融 合而成。在微重力环境下进 行细胞融合,由于重力不存 在,可减轻由细胞不同密度 植物融合细胞成长状态对比右瓶为地面引起的不同沉降而造成的细 融合的细胞,左瓶中为太空微重力环境下胞分离,从而提高细胞融合 融合的细胞 3、细胞融合意义 动物体细胞杂交技术 生单克隆抗体的杂交瘤细胞,单克隆抗体具有专 性和灵敏性,作为理论研究的工具在病原检测和疾病 植物细胞融合技术 A:诱导不同种间、属间甚至不同科间原生质体的融合, 可能打破有性杂交不亲和性的界限,从而有可能形成 有性杂交方法所无法获得的新型杂种植株 B:可将各种细胞器、DNA、质粒、病毒、细菌等外源遗 传物质引入原生质体,从而有可能引起细胞遗传性的 微生物细胞融合技术: 主要用于改良微生物菌种特性、提高目的产物的产量、 使菌种获得新的性状、合成新产物等。 动植物细胞的融合过程 茶本植物A 亲本植物B 9分离的生体 诱导细胞融合 4杂种克降选择 将胚泡移入养母鼠 分化培养 植物细胞融合过程 人造小鼠培育过程示意图 第二节细胞融合原理 植物:将来自不同植物的体细胞经过纤 维素酶、果胶酶消化、除去细胞壁,得 到原生质体,然后通过物理或化学方法 诱导细胞融合形成杂种细胞。再对杂种 细胞进行分捡和培养,促使细胞分裂形 成细胞团、愈伤组织。最后形成杂种植 株。 1、细胞融合讨程 A、两原生质体或细胞相互靠近 B、细胞桥形成阶段: 相互靠近的两个原生质体或细胞在很 局部区域紧密粘连、彼此融合、出现桥 C、融合阶段: 发生胞质渗透、细胞核融合。最后形成 球形的异核体 显微镜下的细胞融合过程