茭白黑粉菌及茭白植株中DNA的提取方法.pdfVIP

（学术版） 2010 （14）：32-35 JOURNAL OF CHANGJIANG VEGETABLES - 32 - DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2010.14.010 茭白黑粉菌及茭白植株中DNA 的提取方法 徐蝉，张敬泽，刘娜，徐晓峰，黄建中，郭得平 （浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州， ） 310058 摘 要：研究了茭白黑粉菌及茭白植株中基因组 DNA 的高效提取方法。 采用改进的 CTAB （十六烷基三甲基溴化铵） 法提取DNA ，根据琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280 的测定和PCR 扩增结果表明，用改进的CTAB 法提取茭白黑粉菌及 茭白植株基因组DNA ，所得 DNA 无论是纯度还是完整性都比较好，适合于酶切和PCR 扩增，可以用于分子生物学 研究。 关键词：茭白；茭白黑粉菌；DNA ；CTAB 法 茭白黑粉菌（Ustilago esculenta P. Henn. ）属黑 研究的基础和关键， 不断有新的DNA 提取方法报 [7] [8] 粉菌目、黑粉菌科，广泛分布于中国、越南、 日本等 道，但不同提取方法的效果有差异 。 吴发红等 比 东南亚地区。 在茭白（Zizania latifolia Turcz. ）生长期 较了几种真菌DNA 提取方法， 认为改良的 CTAB 间，正常茭白植株中均存在茭白黑粉菌菌丝，茭白 法效果最好，并且改良CTAB 法也常用于植物DNA [9~11] 黑粉菌与茭白植株共生，并在茭白植株体内分泌代 的提取 。 本试验参考多位前人提取基因组DNA [1] [8~17] 谢产物刺激茭白花茎基部膨大形成肉质茎 ，从而 的方法 ，采用改进的CTAB 法对茭白黑粉菌及茭 形成经济产量。 目前对茭白黑粉菌及茭白植株分子 白植株的基因组DNA 进行提取， 以期为下一步分 生物学方面的研究鲜有报道，而要进一步深入研究 子生物学研究试验作准备。 其分子生物学特性并得到良好的试验结果，就必须 1 材料与方法 获得适合于内切酶酶切和 PCR 扩增的高质量的 [2] 1.1 材料准备 DNA 。 随着分子生物学技术的不断发展， 基于PCR 茭白黑粉菌成熟冬孢子于2009 年秋采自浙江 技术的分子生物学方法， 如直接测序、RAPD 分析 省湖州市德清县，于PDA 培养基上培养纯化，得到 [18] 和AFLP 分析研究亲缘关系遗传多样性水平，这些 菌落 。 从PDA 培养基上刮下菌落，用无菌去离子