年产吨中性淀粉酶发酵工艺设计.pdfVIP

{生产工艺技术}年产吨中 性淀粉酶发酵工艺设计 前言 淀粉酶属于水解酶类，是水解淀粉和糖原的酶类总称。通常通过淀粉酶催化 水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高， 退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。此类酶广泛存 在于动、植物和微生物中，几乎所有动物、植物和微生物都含有淀粉酶。 淀粉酶是研究较多、生产最早、产量最大和应用最广泛的—类酶。特别是 20 世 纪 60 年代以来由于淀粉酶在淀粉糖工业生产和食品工业中的大规模应用，它的 需要量与日俱增，到目前为止，其产量几乎占到整个酶制剂的50％以上，销售金 额占到 55％～60％。按照水解淀粉的方式不向，主要的淀粉酶有 α—淀粉酶、 β—淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、脱支酶、环糊精葡萄糖基转移酶等。 淀粉酶已经成为工业应用中最为重要的酶之一，并且大量的微生物可以用以 高效生产淀粉酶，但是酶的大规模商业化生产仍然局限于几种特定的真菌和细菌 中。对于高效的淀粉酶的需求越来越多，这可以通过对现有酶的化学改良或者通 白质工艺改良得到。得益于现代生物技术的发展，淀粉酶在制药方面的重要性日 益凸显。当然，食品和淀粉工业仍然是主要市场，淀粉酶在这些领域的需求仍然 是最大的。 中性淀粉酶是目前使用最广泛的一种酶，主要运用于发酵、食品、医药、纺 织及造纸工业。就我国而言一般采用液态深层发酵法生产，但发酵水平低，过滤 困难，使其发展受到了较大的限制。 本课题中以枯草杆菌为实验菌株，采用液体摇瓶发酵，并在培养基中添加发 酵助剂如 Na＋和Tween—80 等来提高酶活。 枯草芽孢杆菌可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。有 的菌株是 α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌。枯草芽孢杆菌菌体自身合 成 α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，可在消化道中与动物体 内的消化酶类一同发挥作用。枯草芽孢杆菌广泛分布在土壤及腐败的有机物 中，易在枯草浸汁中繁殖。 1.菌种的选育 1.1 菌种的选育及制备 不管是在过去、现在和将来，微生物是各种生物活性产物的丰富资源。在发 酵前期，微生物的选择至关重要，此课题设计的是利用枯草芽孢杆菌发酵生产中 性淀粉酶的整体过程。 选择性分离的步骤一般是： 含微生物材料采集——标本材料的预处理——菌种的分离——富集培养 ——菌种初选——菌种复选——性能鉴定——菌种保藏。 1.1.1 含微生物材料的选择 土壤是微生物聚集最丰富的场所，菜园和农田耕作层土壤含有丰富的有机物 常以细菌和放线菌居多，由于枯草芽孢杆菌生活在中性的环境中，可以采集中性 的土壤。采土时先用小铲除去表土，取 5～15㎝深处的土样，选好 3～5 点，每点 取土 10g 混在一起装入灭过菌的牛皮纸袋，并记录时间、地点、植被等情况。 1.1.2 预处理 在培养过程中以淀粉作为唯一或主要碳源，控制 pH 在 6.7～7.2 。那些在所采用 的条件下最适用于淀粉代谢的微生物最终将占优势，并可在淀粉琼脂糖平板上分 离到产生中性淀粉酶的菌株。 1.1.3 所需菌种的纯化和分离 可用平板划线法进行菌种分离。方法如下：用接种管蘸取少量经增殖培养后的菌 液，在含无菌固体培养基的平板表面上进行规则划线，操作时由右向左轻轻划线， 划线时平板面与接种环成 30°～40° ，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线，线条 要平行密集，使两线不能重叠，充分利用表面积，划线时接种环不要嵌入板内划 破培养基，密集的含菌样品，经过多划线稀释，使菌体在平板培养基上逐渐分离 成单个菌株，经培养繁殖成单个菌落，反复进行几次平板划线分离，可得枯草芽 孢杆菌野生菌株。 1.1.4 菌株的培养 常用培养基配方：1L 蒸馏水+10g 蛋白胨+3g 牛肉膏+15～20g 琼脂+5gNaCl 。本课 题以麸皮、豆饼粉作为天然培养基，在37℃保温箱中培养，至培养基中部分出现 成熟颜色即可进行保藏。 1.1.5 菌落的选择 初筛采用透明圈法，方法为在培养基里接入淀粉天青，接入含菌样品后，可 在菌落周围清晰地观察到淡蓝色晕环，初筛选出的微生物经过菌株性状试验后已 确定具有一定生产能力的菌株还要进行复筛。 方法：将初筛后的少数菌株接种于 40ml 锥形瓶内的液体培养基中，110 次 /min 往复式摇床式震荡培养，得到摇瓶种子。 1.2 诱变育种 诱变育种可以利用物理、化学因素诱导遗传特性发生变异，再从变异群 体中选择符合人们某种要求如高产的个体，进而培育成新的品种或种质。 诱变育种操作程序如下： 出