医学论文：注射用双黄连对细菌生物膜影响研究.pdfVIP

【摘 要】目的：建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜（ BBF ）的模型，考察注 射用双黄连对 BBF 形成的影响及抑制作用。方法：在特定的条件、方法下分别对细菌单独 培养和细菌与提取物共同培养，通过酶标仪测量其 OD 值来考察 BBF 的生长能力。结果： 注射用双黄连对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 BDF 的形成均有抑制作用。 【关键词】双黄连；细菌生物膜；影响 建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜 （BBF ）的模型， 考察注射用双黄连对 BBF 形成的影响及抑制作用。 1 BBF 模型的建立 1.1 大肠杆菌 BBF 模型的建立 1.1.1 菌种的复活将大肠杆菌冻干粉加入 0.4mlNB 培 养基溶解后，放入 37℃恒温振荡器（ 230～240 转/ 分钟）中培养 8 小时，分装在离心管中， 加入 0.5ml 的 50%甘油，置于液氮中，于 -80 ℃冰箱中冷藏保存。 1.1.2 大肠杆菌 BBF 模型建立的方法将置于 -80 ℃冰箱中的大肠杆菌划线于 NB 培养基 的平板上，置于恒温培养箱中，于 36℃培养 24 小时。挑取平板上的单一菌落溶于 5mlNB 液体培养基中，于 36℃恒温振荡器中振荡 8 小时，得到单克隆细菌增殖培养的菌液，备用。 将菌液稀释 100 倍置于 96 孔板中，四周为 NB 培养基作为空白。置于恒温培养箱中， 于 36℃培养 24 小时，取出。将菌液倾出，用蒸馏水反复清洗后，加入 0.1%结晶紫染色 30 分钟后，将结晶紫倾出，洗净，加入 1%脱氧胆酸钠溶液， 30 分钟后，测其 600nm 处的 OD 值。以菌液浓度为横坐标，以 OD 值为纵坐标，考察 BBF 生长情况。 1.2 影响大肠杆菌 BBF 生长的因素通过实验的反复摸索， 我们发现影响大肠杆菌 BBF 生长的因素主要有以下几种：①菌种：不同的大肠杆菌菌株对 BBF 的影响很大，直接影响 到 BBF 的生长与否和 BBF 形成的好坏。 且大肠杆菌传代越多， BBF 的生长情况越不好， 故 我们每次实验均采用大肠杆菌的第二代菌株。 ② 96 孔板的材质：不同的细菌在不同材质的 96 孔板上的生长情况是不同的。我们选用 了市场上常见的三种 96 孔板分别是进口聚氯乙烯（ PVC ）板，国产聚苯乙烯（ PS）板，进 口聚苯乙烯板，大肠杆菌分别在不同材质的 96 孔板上培养。结果，大肠杆菌在国产 PS 板 上的生长情况是最好的。 ③培养时间：考虑到实验操作时间的可行性，我们选定将大肠杆菌分别培养 18 小时、 24 小时、 36 小时，考察 BBF 的生长情况。结果，大肠杆菌在培养 24 小时后， BBF 的生长 情况最好。 1.3 金黄色葡萄球菌 BBF 的建立及影响因素金黄色葡萄球菌的 BBF 模型的建立方法基 本上与大肠杆菌的相同。在这里就不做详细的介绍。我们仍旧分别考察了 96 孔板的材质、 培养时间及菌液浓度等因素，最终确定金黄色葡萄球菌菌液稀释 100 倍、于国产 PS 板上培 养 24 小时， BBF 的生长的最好且稳定。 2 注射用双黄连对