细胞生物学实验三细胞骨架显示.pptVIP

实验三、动植物细胞骨架显示 细胞骨架定义 ? 细胞骨架（ cytoskeleton ）是指真核细胞中的 蛋白纤维网架体系。 ? 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、 细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指 细胞质骨架，包括微丝（ microfilament ， MF ）、 微管（ microtubule ， MT ）、中间纤维 （ intermediated filament ， IF ）。 ? 微丝、微管、中间纤维 ? 微丝 ：粗约 6nm ，实属肌动蛋白（ actin ）细丝； 主要作用是确定细胞表面特征、使细胞能运动和 收缩 ? 微管 ：为直径约 20 ～ 26nm 的长度不一的小管，管 壁由 13 根纵列的原丝构成；主要确定膜性细胞器 的位置和作为膜泡运输的导管 ? 中间丝 ：也叫中间纤维，直径在微丝和微管之间 （ 7 ～ 11nm ）；中间纤维是最稳定的骨架成分， 使细胞具有张力和抗剪切力，主要起支撑作用， 围绕细胞核成束、成网、并扩展到细胞质与质膜 相连。 细胞骨架作用 ? 1 、支撑结构，决定细胞的形状； ? 2 、参与细胞运动 ? 3 、参与物质运输 ? 4 、参与细胞分裂 ? 5 、引起细胞极性生长 ? 6 、其他：能量转换、信息传递、基因表达、细胞 分化等 研究细胞骨架的意义 ? 1 、对肿瘤进行分类和鉴别诊断。对细胞骨 架中的中间丝化学性质各异，在不同细胞 由不同的蛋白质和多肽组成；由于这些不 同种类不同性质的中间丝在细胞转化为肿 瘤细胞时，仍不改变其化学和抗原特异性， 故可利用这种特性借助免疫细胞化学方法 对肿瘤进行分类和鉴别诊断。 培养的动物细胞骨架 洋葱鳞茎细胞骨架 实 验 目 的 掌握用考马斯亮蓝 R250 染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。 实 验 原 理 用去垢剂 Triton X － 100 处理细胞，可将细 胞的膜结构和大部分其他蛋白抽提掉，剩下 细胞骨架系统的蛋白，再用蛋白染料考马斯 亮蓝染色，即可显示骨架结构。 材料 体外培养的贴壁生长细胞 洋葱鳞茎内表皮 用品与试剂 ? 用品略。 实 验 步 骤 A 、动物细胞的微丝观察 1 ）将细胞培养在盖玻片上。取出盖玻片，用 PBS 洗 3 次。 2 ）室温下用 1%TritonX-100 （ M- 缓冲液配）处理 20-30 min 。 3 ）用 M- 缓冲液轻轻洗细胞 3 次。 4 ）用 3.0% 戊二醛（ M- 缓冲液配）固定细胞 10 min 。 5 ）用 PBS 洗 3 次，滤纸吸干。 6 ）用 0.2% 考马斯亮蓝 R250 染片子 30 min 。蒸馏水冲洗，在空气中自然 晾干。 7 ）在光学显微镜下观察。 实 验 步 骤 B 植物细胞的微丝观察 1 ）撕取洋葱鳞茎内表皮若干片（约 1cm 2 ） ，放入盛有 0.2mol/L 的 PBS （ pH 6.8 ）的小烧杯中 2 － 3min 。 2 ）吸去缓冲液，用 1%TritonX-100 （ M- 缓冲液配）处理 20 min 。 3 ）吸去 TritonX-100 ，用 M- 缓冲液充分洗 3 次，每次 5min 。 4 ）加 3.0% 戊二醛（ M- 缓冲液配）固定 30 min 。 5 ）用 PBS 洗 3 次，每次 5min ，滤纸吸去残留液体。 6 ） 0.2% 考马斯亮蓝 R250 染色 10 min 。 7 ）用蒸馏水洗数遍，降低背景。 8 ）将样品置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。