体外检测人Th17细胞频率的方法.pdfVIP

军 医 进 修 学 院 学 报 2010 Jan，31（1） ·50· J Chinese PLA Postgrad Med Sch 体外检测人Th17 细胞频率的方法 1, 2 3 3 3 2 黄　昂 ，张纪元 ，张　政 ，王福生 ，邹正升 1 2 3 解放军总医院 学员队，北京　100853 ； 解放军 302 医院 感染四科，北京　100039 ； 解放军 302 医院 传染病研究所，北京　100039 摘要: 目的 探讨不同刺激对象、刺激剂量、刺激时间、蛋白质运送抑制剂对体外检测人 Th17 细胞频率的影响。方法 用 不同浓度的佛波酯 (PMA，终浓度 25、50、150、300、500、750、1 000ng/mL) 与离子霉素 (Ionomycin) 对健康人全血和外 周血单个核细胞 (PBMC) 进行刺激，1h 后加蛋白质转运抑制剂布雷杆氏菌素 A(BFA) 或莫能菌素 (Monensin)，分别培养 3h、 6h、9h，收集细胞，以荧光素 -mAb 标记后，用流式细胞术分析 Th17 频率。结果 全血刺激好于 PBMC 对 Th17 频率的检 测效果 (P0.05)，PMA 300ng/mL 刺激全血时 Th17 频率最高，BFA 或 Monensin 阻断 IL-17 分泌效果相同但溶血有差异，刺 激6h最适宜。结论 PMA 300ng/mL + Ionomycin刺激全血1h后加Monensin 2μmol/L继续培养6h，是检测人Th17细胞频率 最适宜的方法。 关键词: Th17 ；细胞 ；方法 ；流式细胞术 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： R 34　　 A　　 1005-1139(2010)01-0050-03 In vitro detection of the frequency of human Th17 cells 1,2 3 3 3 2 HUANG Ang , ZHANG Ji-yuan , ZHANG Zheng , WANG Fu-sheng , ZOU Zheng-sheng 1 2 Student Team, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China; Fourth Department of Infectious Diseases, Chinese PLA 302 Hospital, Beijing 100039, China; 3 Institute of Infectious Diseases, Chinese PLA 302 Hospital, Beijing 100039, China Corresponding author: ZOU Zheng-sheng. Email: zzs302@ Abstract: Objective To investigate the effect of different stimulated objects, different stimulating concentrations, different protein transportation inhibitors on the frequency of human Th17 cells. Methods Whole blood or peripheral blo