微生物学实验教学内容.docVIP

实验十一 产蛋白酶芽孢杆菌的分离（一） ———芽孢杆菌的分离 一、目的和要求 1. 学习用选择平板从自然界中分离胞外蛋白酶产生菌的筛选方法。 2. 学习和掌握芽孢杆菌的分离技术。 二、实验原理 芽孢杆菌于芽孢具有较强的抗高温能力，分离纯化时可采用热处理的方法，即通过高温加热杀死其中不生芽孢的菌种，使耐热的芽孢菌得到富集。许多芽孢杆菌能分泌分泌蛋白酶，淀粉酶，可以选择酪蛋白或淀粉为主要营养成分的分离培养基，因菌体分泌的酶可以将大分子的蛋白或淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。根据透明圈直径(H)和菌落直径(C)之比值(H/C)可以初步确定酶活力，其比值越大，酶活力越高，进而可筛选出高产酶活的菌株。 三、实验器材 1. 土壤样品：从地表下10~15cm的土壤或者枯枝烂叶，腐烂稻草中用无菌小铲，纸袋取土样，并记录取样的地理位置、pH、植被情况等(学生自取)。家畜饲养、屠宰等动物性蛋白丰富的地点土壤中筛选高产蛋白酶菌株的概率更大，若条件许可，建议尽量选择这样的地点进行采样。 2. 牛肉膏蛋白胨培养基（1000ml, 配制时，只加800ml，每个三角瓶分装180ml），15%脱脂奶粉溶液（脱脂奶粉用水溶解后应单独灭菌（0.06MPa,30min）， 铺平板前与加热溶化的肉汤蛋白胨培养基混合），盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃