亚硝酸盐含量测定方法.pdfVIP

亚硝酸盐测定 1、原理 样品经沉淀蛋白质、 除去脂肪后， 在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨 基苯磺酸重氮化后，再与 N －1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料， 与标准比较定量。 2、试剂 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。 2.1 氯化铵缓冲液： 1L 容量瓶中加入 500mL 水，准确加入 20.0mL 盐酸，振荡混匀，准确加入 50mL 氢氧化铵，用水稀释至刻 度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至 pH9.6～9.7。 2.2 硫酸锌溶液 (0.42mol/L) ：称取 120g 硫酸锌 (ZnSO 7H· O)， 4 2 用水溶解，并稀释至 1L 。 2.3 氢氧化钠溶液 (20g/L) ：称取 20g 氢氧化钠用水溶解，稀释 至 1L 。 2.4 对氨基苯磺酸溶液：称取 10g 对氨基苯磺酸，溶于 700mL 水和 300mL 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。 2.5 N －1－萘基乙二胺溶液 (1g/L) ：称取 0.1gN－1－萘基乙二 胺，加 60%乙酸溶解并稀释至 100mL ，混匀后，置棕色瓶中，在冰 箱中保存，一周内稳定。 2.6 显色剂：临用前将 N －1－萘基乙二胺溶液 (1g/L)和对氨基 苯磺酸溶液等体积混合。 2.7 亚硝酸钠标准溶液：准确称取 250.0mg 于硅胶干燥器中干 燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，加 100mL 氯化 铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在 4℃避光保存。此溶液每毫升 相当于 500 μg的亚硝酸钠。 2.8 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 1.00mL，置于 100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相 当于 5.0 μg亚硝酸钠。 3 仪器 3.1 小型粉碎机。 3.2 分光光度计。 4 操作方法 4.1 样品处理 称取约 10.00g(粮食取 5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加 70mL 水和 12mL 氢氧化钠溶液 (20g/L) ，混匀，用氢氧化钠溶液 (20g/L) 调样品 pH＝8 ，定量转移至 200mL 容量瓶中加 10mL 硫酸锌溶液， 混匀，如不产生白色沉淀， 再补加 2～5mL 氢氧化钠，混匀。置 60℃ 水浴中加热 10min，取出后冷至室温， 加水至刻度， 混匀。放置 0.5h， 用滤纸过滤，弃去初滤液 20mL ，收集滤液备用。 4.2 测定 4.2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取 0，0.5，1.0，2.0，3.0， 4.0，5.0mL 亚硝酸钠标准使用液 (相当于 0，2.5，5 ，10，15，20，25 μg 亚硝酸钠 )，分别置于 25mL 带塞比色管中。于标准管中分别加入 4.5mL 氯化铵缓冲液，加 2.5mL60%乙酸后立即加入 5.0mL 显色剂， 加水至刻度，混匀，在暗处静置 25min ，用 1cm 比色杯 (灵敏度低时 可换 2cm 比色杯) ，以零管