离子交换层析理...pptVIP

第五章离子交换层析 离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离 子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同, 经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法 离子交换层析具有灵敏度高,重复性、选择性 好,分析速度快等优点,是当前最常用的层析法之  1848年, Thompson等人在研究土壤碱性物质交换过 程中发现离子交换现象。本世纪40年代,出现了具有稳定 交换特性的聚萃乙烯离子交换树脂。50年代,离子交换层 析进入生物化学领域,应用于氨基酸的分析。目前离子交 换层析仍是生物化学领域中常用的一种层析方法,广泛的 应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核苷酸等的 分离纯化  第一节基本原理 离子交换剂 纤维素—OCH2COO=Na 基质电荷基团反离子 特性 在水中呈不溶解状态,能释放出反离子。同时它 与溶液中的其他离子或离子化合物相互结合,结合后 不改变本身和被结合离子或离子化合物的理化性质。  离子交换反应 离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应 主要是以离子交换方式进行。所进行的离子交换反应 是可逆的。假定以RA代表阳离子交换剂,在溶液中解 离出来的阳离子A与溶液中的阳离子B可发生可逆的 交换反应,反应式为: RA+B+→RB+A+ 该反应能以极快的速率达到平衡,平衡的移动遵 循质量作用定律。  示意图(离子交换过程) 电离基团(磺酸根 ●可交换离子(钠离子) 交换离子 不交换离子  离子交换剂对溶液中不同离子具有不同的结合力, 结合力的大小取决于离子交换剂的选择性 离子交换剂的选择性可用其反应的平衡常数K表示: K=[RB][A]/[RA][B+] 如果反应溶液中[A]等于[B+],则K=[RB]/[RA 若K》1,即[RB]IRA],表示离子交换剂对B的结合 力大于A+; 若K=1,即R]=[RA],表示离子交换剂对A+和B+ 的结合力相同; 若K1,即[RB][RA],表示离子交换剂对B的结合 力小于A K值是反映离子交换剂对不同离子的结合力或选择 性参数,故称K值为离子交换剂对A和B的选择系数。  如Na+Ca2A3+Si4+。如 影响离子交换选井原子价数相,交换量则随 交换离子的原子序数的增加 水合离子半径:半径越小,亲和力越”而增大,如 ILi+ Na+K+ Pb+。在稀溶液中适用。 离子化合价:高价离子1、竞争:2、增加蛋白 溶液彩响交换基日隔將熒獷维:,降低吸不但影响交换容量;对 交换选择性影响亦大 令离孑强度:越低越 在稀溶液中,强碱性树脂的各负电性基团的离子 有机溶剂:不利于结合力次序是:CH3 COo-F-sOH-Hcoo-scIBr 交联度、膨胀度 cro42No2lC2O42S042柠檬酸根 弱碱性阴离子交换树脂对各负电性基团结合力的 度小,膨胀度大,次序为:FCBr==CHCOMQ2PO3 树脂与粒子间的辅As2NO3酒石酸根柠檬酸根co2S02 OH  两性离子如蛋白质、核苷酸、氨基酸等与离子交换剂的 结合力,主要决定于它们的理化性质和特定的条件下呈现 的离子状态。当pHpI时,能被阳离子交换剂吸附,反之, 当pHp时,能被阴离子交换剂吸附。若在相同pI条件下, 且pIp时,pI越高,碱性越强,就越容易被阳离子交换剂 吸附。 离子交换层析就是利用离子交换剂的荷电基团,吸附溶 液中相反电荷的离子或离子化合物,被吸附的物质随后为 带同类型电荷的其他离子所置换而被洗脱。由于各种离子 或离子化合物对交换剂的结合力不同,因而洗脱的速率有 快有慢,形成了层析层。  离子交换机理 A自溶液中扩散到树脂表面 令A+从树脂表面进入树脂内部的 活性中心 薄膜 今A与RB在活性中心上发生复分 解反应 令解吸附离子B自树脂内部扩散 树脚 至树脂表面 令B离子从树脂表面扩散到溶液 中 令交换速度的控制步骤是扩散速图6.918离子交换过程的机理 度,不同的分离体系可能由内 部扩散或外部扩散控制  影响交换速度的因素 颗粒大小:愈小越快 交联度:交联度小,交换速度快 温度:越高越快,与扩散系数增加有关 令离子化合价:化合价越高,扩散速度小 令离子大小:越小越快 ◆搅拌速度:在一定程度上,越大越快 令溶液浓度:当交换速度为外扩散控制时,浓度越大,交换速 度越快