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- 2020-09-10 发布于天津
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普通电泳的原理 ? 生物大分子(如蛋白质,核酸,多糖等) 大多都有阳离子和阴离子基团 , 称为两性离 子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电 荷取决于介质的 H+ 浓度或与其他大分子的 相互作用。 ? 在电场中 , 带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁 移的方向取决于它们带电的符号 , 这种迁移 现象即所谓电泳。 ? 电泳的样品支持物,生物实验大多为凝胶。 普通电泳设备组成 电泳仪 + 电泳槽 普通电泳槽分三种: 水平电泳 垂直电泳 转移电泳 水平电泳 ? 用 琼脂糖凝胶 作支持物的电泳法。借助琼 脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分 子量或分子形状不同,电泳移动速度有差 异而分离。 ? 是基因操作中常用的重要方法。 水平电泳槽图片 垂直电泳 ? 作用:用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。 ? 作用原理 聚丙烯酰胺凝胶 为网状结构,具 有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚 丙烯酰胺凝胶及 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶( SDS- PAGE );非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳 的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并 依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状 及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 垂直电泳槽图片 湿转电泳 ? 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离后,转移至固相膜上 ,再用标记的抗体 或二抗与之反应,以显示膜上特定的蛋白 条带。 ? 整个电泳过程 完全浸在缓冲液中 完成的称 为湿转电泳 湿转电泳槽图片 半干转电泳 ? 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离后,转移至固相膜上 ,再用标记的抗体 或二抗与之反应,以显示膜上特定的蛋白 条带。 ? 膜和滤纸均为浸湿 而非整个电泳过程完全 浸在缓冲液中完成的称为半干转电泳 半干转电泳槽图片 1. 安全盖 2. 带有弹簧锁的负电 极装置 3. 滤纸 4. 凝胶 5. 膜 6. 滤纸 7. 带弹簧的正电极平 台固定于 4 个固定栓 上 8. 电缆 9. 底座 普通电泳仪大体分三种 基础电泳仪 高电流电泳仪 高电压电泳仪 基础电泳仪 ? 参数:一般电压为 几百伏特 ,电流为 几百 毫安 。 ? 应用:主要用于 水平电泳、垂直电泳、湿 转电泳
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