实验一布氏杆菌病的检疫.pptVIP

实验一 布氏杆菌病的 检疫 实验目的 1. 初步了解布鲁氏菌病的免疫生物学 检疫方法的种类和每种方法的优缺点。 2. 掌握布氏杆菌病的免疫生物学检疫 的具体操作方法和结果的观察、判定。 实验材料 教学录像结合教师演示操作 器材：中试管、玻璃板、微量移液器、 5ml 吸管、 tip 头等。 试剂：布氏杆菌病试管凝集抗原，阳、阴性血清； 布氏杆菌虎红平板板凝集抗原，阳、阴性 血清；新鲜牛血清， 0.5% 石碳酸生理盐水； 实验原理 布氏杆菌病的血清学检验方法中以凝集试验 最为常用，机体感染后 1 周即产生凝集抗体，一 般流产后 1-2 周达最高，经半年开始下降，可持 续 2-4 年，具体方法可采用试管凝集试验法和虎 红平板凝集试验法。 实验方法 ---- 试管凝集试验 骤 一、操作步骤 试管 稀释液 ml 待检血清 ml 1:20 稀释抗 原 ml 稀释度 1 2.4 0.1 ---- 1 ： 25 2 ------ 0.5 0.5 1 ： 25 3 0.5 0.5 0.5 1 ： 50 4 0.5 0.5 0.5 1 ： 100 5 0.5 0.5 0.5 1 ： 200 实验方法 ---- 试管凝集试验 二、制备比浊管 管号 1 ： 20 稀释抗 原液 ml 稀释液 ml 清亮度 % 标记 1 0.0 1.0 100 ++++ 2 0.25 0.75 75 +++ 3 0.5 0.5 50 ++ 4 0.75 0.25 25 + 5 1.0 0.0 0 - 全部试管充分振荡后，置于 37 ～ 38 ℃溫 箱中， 22 ～ 24 小时后用比浊管对照检查记 录结果，出现 50% 以上凝集的最高稀释度 就是这份血清的凝集价。 试管凝集试验 ? 结果判定： 血清凝集价为 1 ： 100 以上，为阳性。 血清凝集价为 1 ： 50 为可疑，可疑反应的家 畜经 3 ～ 4 周重检，仍为可疑者判为阳性。 注意事项 ? 试管凝集试验，可出现非特异性反应： ? I ）假阴性 ? 原因 : ① 检查时，动物处于潜伏期； ? ② 幼年畜，细菌在局部淋巴结， ? 活动受限制，抗体滴度低。 ? ③ 母畜怀孕后期，母源抗体随血 ? 液循环至乳腺排出。 ? ④ 布鲁氏菌病慢性，长期刺激， ? 动物对抗原不敏感，故抗体滴 ? 度不高。 ? II ）假阳性 ? 动物感染巴氏、土抗、弯杆菌、大肠 杆菌的某些群等 G － 菌，与布鲁氏菌有类 属抗原，抗体滴度一般在阳性及格，重检， 可能下降，再检，最多维持原来水平。 实验方法 --- 虎红平板凝集试验 一、实验步骤 取被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各 0.03ml 滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支 火柴棒混合均匀，在室温（ 20 ℃） 4 ～ 10 分钟内 记录结果，同时以阴、阳性血清作对照。 实验方法 --- 虎红平板凝集试验 ? 结果判定： 在阳性血清及阴性血清实验结果正确的 对照下，被检血清出现任何程度的凝集现 象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性， 无可疑反应。