低强度纳秒脉冲电场联合MWCNTs杀伤A375细胞的剂量效应.pdfVIP

中文摘要 摘 要 纳秒脉冲电场（nsPEF ）可以通过诱导细胞凋亡而使肿瘤组织缩小甚至消失， 对于肿瘤治疗具有特别重要的意义。但是由于脉宽过窄，为了保证疗效必须提高 脉冲幅值，高场强容易导致组织的沿面放电和肌肉收缩，严重影响了治疗过程中 的电气安全性。具有优异电学特性的准一维纳米材料多壁碳纳米管（MWCNTs ） 已经被证明可以提高脉冲电场的生物电效应，nsPEF 与MWCNTs 在肿瘤治疗中的 联合应用有望显著降低外加电场，从而提高治疗过程中的电气安全性。为了对后 续开展机理研究时选择脉冲参数提供必要的参考依据，本文通过实验和仿真开展 了低强度nsPEF 联合MWCNTs 对癌细胞杀伤效果的剂量效应研究。 首先，通过CCK-8 检测方法在确定MWCNTs 安全浓度的基础上研究了nsPEF 联合MWCNTs 影响离体A375 细胞活性的剂量效应，基于logistic 模型利用一元非 线性回归分析方法建立了细胞活性与场强E 、脉宽τ、脉冲个数N 等单因素以及多 因素间的定量函数关系。结果表明细胞活性随单一脉冲参数的变化整体呈现剂量 越大，活性越低的规律。细胞活性随场强、脉宽的变化具有阈值效应（S 型变化）， 但是随脉冲个数却没有明显的阈值效应 （指数型变化），并且随单一脉冲参数的变 2 化都呈现饱和效应。细胞活性随脉冲能量密度σE τN 的增加呈现S 型下降。 其次，在细胞活性实验的基础上通过Annexin V/PI 染色法研究了低强度nsPEF 联合 MWCNTs 对癌细胞凋亡坏死率的影响，分析造成细胞活性下降的内在机制。 结果表明，细胞凋亡率和坏死率随场强、脉宽、脉冲个数的增加而增加，从而导 致细胞活性的降低。 最后，通过 COMSOL 软件建立球形单细胞五层介电模型，仿真分析了加入 MWCNTs 后不同纳秒脉冲参数对细胞内外膜穿孔特性的影响。结果表明，当场强 或者脉宽低于一定阈值时，nsPEF 对细胞内外膜的穿孔特性几乎无影响，而超过这 一阈值后，场强或脉宽的增加都会增强内外膜的电穿孔效应。脉冲个数越多，细 胞内外膜的穿孔状态维持时间越久，膜穿孔通量越大，导致内外物质的交换越充 分，细胞死亡率越高。仿真结果与细胞实验结果体现出来的变化规律基本一致。 细胞实验及仿真结果表明，MWCNTs 的引入不影响上述变化规律，但是可以 显著增强 nsPEF 对肿瘤细胞的杀伤效果和电穿孔效应，并且增强机制是基于其尖 端集电效应，可以畸变增强局部电场。加入MWCNTs 后可以在发挥nsPEF 诱导肿 瘤细胞凋亡的优势前提下提高其杀伤效果以及电气安全性，具有重要的意义。 关键词：纳秒脉冲电场；多壁碳纳米管；细胞活性；凋亡坏死率；电气安全性 I 英文摘要 Abstract It has been demonstrated that nanosecond pulsed electric field (nsPEF) can shrink or even disappear tumor tissue by inducing apoptosis, which is of particular importance for tumor treatment. However, because the pulse width is too narrow, to ensure the therapeutic effect, the pulse amplitude must be increased. The high field strength easily leads to the surface discharge and muscle contraction of the tissue, which seriously affects the electrical safety