丹参—红花药对活性成分的筛选及其斑马鱼代谢研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 血瘀证指瘀血内阻，它的发生与凝血功能异常有密切的关联，可以表现为血 小板聚集异常增强以及凝血功能活化。药对是两种中药配伍用药的基本形式，可 以实现增强、协同、抑制或相互拮抗等作用。对药对的探究不仅能够反映单味药 在复方中的作用，也可用于探究复方药物间的相互作用，深入研究其配伍规律。 本论文旨在建立谱效关系分析方法用于筛选活血化瘀中药药对丹参-红花发挥活血 化瘀、抑制酪氨酸酶以及抗氧化作用的主要活性成分，对活性成分之间代谢的相 互影响进行了初步探究，并建立斑马鱼血栓模型用于活性成分药效的初步评价。 论文一共包括以下七个部分（章节）： 第一部分为文献综述部分，首先简要阐述了丹参-红花药对的化学成分及药理 作用，然后概述了谱效关系的研究及其数据处理方法，简要介绍了斑马鱼的研究 现状，最后提出了本论文的研究目的以及研究内容。 第二部分建立谱效关系分析方法用于筛选丹参-红花药对中的活血作用活性成 分。首先采用回流提取法对不同比例（1:1、2:1 、3:1 、5:1 、1:5、1:3）丹参-红花 进行提取；同时，以冰水浴法建立大鼠血瘀模型，以 0.9%生理盐水为空白对照， 以抗凝血实验比较不同比例丹参-红花提取物的体内药理作用，采用典型相关分析 （CCA ）将药理实验结果数据与药对液相图谱（峰面积）进行谱效学分析。结果 筛选出15 个潜在活性成分，鉴定出8 个成分的化学结构，并对其中5 个单体成分 进行体外活性验证。实验结果表明，所建立的谱效学筛选方法可快速、有效地筛 选丹参-红花活血作用的主要活性成分，其中咖啡酸、丹酚酸 B 、羟基红花黄色素 A 和紫草酸等单体被证实具有显著的活血作用，可为其临床用药的开发提供实验 依据。 第三部分采用谱效关系分析方法筛选丹参-红花药对中抑制酪氨酸酶的活性成 分。首先采用回流提取法对不同比例（1:1、2:1 、3:1 、5:1、1:5、1:3、1:2）丹参- 红花进行提取；同时，以曲酸为阳性对照，以抑制率比较不同比例丹参-红花提取 物抑制酪氨酸酶的活性，采用典型相关分析（CCA ）将抑制实验结果与药对液相 图谱（峰面积）进行谱效学分析，并利用分子对接技术对活性成分与酪氨酸酶的 活性位点进行预测。结果筛选出 16 个潜在活性成分，鉴定出 13 个成分的化学结 构，并对其中 5 个单体成分进行体外活性验证。实验结果表明，原儿茶醛、丹参 酮IIA 和羟基红花黄色素 A 具有显著的酪氨酸酶抑制作用，并且其部分活性位点 与阳性药曲酸相同。实验结果证实了谱效分析方法能有效地筛选复杂体系中的酶 抑制活性成分，并且这些活性化合物的结构特点也可为其他酪氨酸酶抑制剂的发 I 重庆大学硕士学位论文 现提供参考。 第四部分采用谱效关系分析方法筛选丹参-红花药对中抗氧化的活性成分。首 先采用回流提取法对不同比例（1:1、2:1 、3:1 、5:1 、1:5、1:3、1:2）丹参-红花进 行提取；同时，以维生素C 为阳性对照，以对DPPH 的清除率比较不同比例丹参- 红花提取物的抗氧化活性，采用典型相关分析（CCA ）将清除率与药对液相图谱 （峰面积）进行谱效学分析。结果筛选出18 个潜在活性成分，鉴定出 13 个成分 的化学结构，并对其中 8 个单体成分的抗氧化作用进行了体外验证。实验结果表 明，咖啡酸、芦丁、羟基红花黄色素 A 、丹参素、原儿茶酸、丹酚酸A 以及绿原 酸这些单体具有显著的抗氧化活性。 第五部分探究筛选出的活性单体成分在斑马鱼体内代谢的相互影响。首先通 过LC-MS 分析初步鉴定了丹参酮 IIA、丹参素、丹酚酸B 、原儿茶醛以及羟基红 花黄色素 A 在斑马鱼体内的代谢产物，然后通过单药及混合用药后代谢产物含量 的变化分别探讨了红花中的成分羟基红花黄色素A 对丹参中的成分丹参酮IIA、丹 参素、丹酚酸B 、原儿茶醛的代谢影响（促进或抑制），最后总结分析了这些成分 的代谢特征和代谢相互影响。实验结果可为丹参-红花药对相互作用研究提供参考。 第六部分是建立斑马鱼血栓模型评价丹参-红花药对中筛选出的活性单体成分 的药效。首先以苯肼为诱导剂建立斑马鱼血栓模型，然后以纯水为空白对照，以 阿司匹林为阳性对照，评价筛选出的活性成分如原儿茶醛、丹参素、丹酚酸