秀丽隐杆线虫中SKN-1对DAF-16调控与功能影响的研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 秀丽隐杆线虫 (Caenorhabditis elegans）为当今寿命相关研究中运用的主要模 式生物之一，因其寿命短，易于培养与观察等优点被广泛应用于各种生物学实验。 从第一个在线虫中被发现的长寿突变体线虫开始，后续研究在线虫中发现了大量 寿命相关基因，同时由于这些基因存在保守性，其在果蝇、小鼠及人类等生物体 中存在同源基因，因此相关研究在衰老和寿命的研究具有重大的意义。在众多被 发现的寿命延长突变体中，SKN-1 与 DAF-16 在维持长寿命中起到关键的作用。 SKN-1 是哺乳动物Nrf2 蛋白的同源蛋白，发挥转录因子的功能。SKN-1 在生理上 起压力应激，解毒，氧化平衡调节，免疫与脂代谢调控等重要作用，是一些突变 体寿命延长所需的必要调控因子。DAF-16 是线虫体内另一个参与应对压力与长寿 相关调控的重要转录因子，与哺乳动物FOXO 蛋白同源。同样，DAF-16 既参与了 氧化应激，热激与免疫等重要压力应激反应的调控，同时也是线虫寿命延长的关 键因子之一。 在很多长寿相关的线虫突变体的研究中都观察到DAF-16 与SKN-1 二者被激 活的现象，且缺少二者之一，长寿表型都无法维持。两者都是线虫体内寿命与健 康息息相关的转录因子，但关于二者相互之间的调控关系，以及二者之间是否存 在直接影响可能的研究却非常的少。 本研究发现 SKN-1 持续性激活突变体线虫skn-1(lax120) 的抗热能力低于野生 型线虫。此现象预示SKN-1 存在通过DAF-16 调控线虫的抗热能力的可能。我们 通过绿色荧光蛋白追踪，定量 PCR 与热激实验等方法验证了 SKN-1 通过抑制 DAF-16 的入核从而影响线虫抗热性的猜想， 通过文献阅读了解到SKN-1 与线虫 卵黄蛋白原合成相关 VITs （vit-1，vit-2 ，vit-3 ，vit-4 ，vit-5，vit-6）基因之间的联 系，并通过油红染色，热激实验与GFP 荧光观察等方法验证SKN-1 与VIT-2 对于 DAF-16 与脂类的调控作用。我们猜测SKN-1 与VITs 同属于通过不饱和脂肪酸调 控DAF-16 功能的途径中。因此，我们通过GC-MS/MS 测定了skn-1(lax120)线虫 与野生型线虫的脂肪酸含量，并发现除了研究较多的油酸之外，SKN-1 同样影响 了线虫的棕榈油酸含量。为此，我们进一步利用线虫内棕榈油酸合成相关基因fat -5 进行了系列实验，确认了FAT-5 缺失突变体fat -5(tm420)与SKN-1 持续性激活突变 体线虫skn-1(lax120)一样，其体内DAF-16 入核过程被一定程度上抑制从而导致热 抵抗能力削弱。结合这些结果，我们推测SKN-1 可能通过VITs 影响棕榈油酸并最 终调控DAF-16 的功能。 本研究发现 SKN-1 与DAF-16 这两个重要的寿命及健康相关因子之间存在直 I 重庆大学硕士学位论文 接影响关系。这对今后的相关科研工作有重要的参考作用。DAF-16 与SKN-1 虽然 都参与对免疫与氧化等压力应激反应的调控，也是很多长寿型线虫必需的转录因 子，但其功能上侧重点略有不同。SKN-1 对于氧化应激的影响更大，而 DAF-16 对抗热性的调控更强。与此同时，线虫内棕榈油酸及其下游脂肪酸的结构与功能 一直少有研究，我们发现其可能在两个重要转录因子相互调节之间起了关键的纽 带作用。我们发现SKN-1 或是通过卵黄代谢影响棕榈油酸最终调控DAF-16，这或 许在一定程度上为我们研究 SKN-1 与DAF-16 这些重要转录因子与脂代谢之间关 系，以及这种关系对线虫健康和寿命的影响提供参考。 关键词：秀丽隐杆线虫；DAF-16；棕榈油酸；SKN-1；VIT-2 II 英文摘要 Abstract