酶切连接和转化精析.pptVIP

限制性酶切、连接与转化 酶切 1、核酸酶的分类 核酸酶:通过切割相邻的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,从而导 致核酸分子多核核苷酸链发生水解断裂的蛋白酶。 核酸酶可分为两类:核酸外切酶( exonuc lease)是从 核酸的一端开始,一个接一个把核苷酸水解下来; 核酸内切酶( endonuc lease则从核酸链中间水解3’, 磷酸二酯键,将核酸链切断。 ?如果内切酶可以切掉入侵的病毒DNA, 为什么它们不会破坏宿主细胞自身的 DNA 限制修饰系统简称RM系统 restriction modification 类似于免疫体系,他能够识别自己的DNA和外 来的DNA,并使外来的DNA降解。 由两种酶来控制:修饰的甲基转移酶和核酸限 制性内切酶。 当外源的含有限制性酶特定位点的核酸进入细 胞时,相应的核酸限制性酶就会将其解。但是菌体 内的很多核酸也同样含有这样的序列,这时特异的 甲基化酶就起作用了。甲基化酶在内源的部分核酸 还没被限制以前就被甲基化了,这种甲基化核酸序 列是限制性酶无法作用的。 2、限制性酶切的原理: 限制性核酸内切酶( restriction endonuclease)能特异地 结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列 之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。 3、限制性核酸内切酶的类型和主要特征: T型型 III型 功能内切酶甲基化内切酶内切酶 酶