《兽医免疫学》实验课件：实验一 凝集反应.pptVIP

实验一 凝集试验 一、玻片凝集试验 二、试管凝集试验 一、玻片凝集试验 原理：颗粒性抗原（如细菌、立克次氏体、螺 旋体、红细胞或细胞悬液）或表面覆盖 抗原或抗体的颗粒状物质，与相应抗体 或抗原结合后，在有电解质存在时，抗 原（颗粒）互相凝集成肉眼可见的凝集 小块，称为凝集反应。可对待检抗原或 抗体进行定性测定。 目的：掌握玻片凝集试验操作方法 及结果判定方法。 实验材料，以鸡白痢平板凝集试验为例： 鸡白痢多价抗原； 鸡白痢阴、阳性血清； 玻片、滴管及塑料吸头等； 被检鸡或血清 一、玻片凝集试验 （2）抗原在临用前，须摇匀，用滴管吸取抗原一滴（约0.05mL），垂直滴于波片上，然后等体积加入被检血清，随即用塑料吸头搅拌均匀，并使散开至直径2厘米左右。同时设阳性和阴性对照。 　　注：一定要散开，否则凝集现象不明显。 方法及结果判定： （1）试验应在20℃以上室温中进行。 一、玻片凝集试验 混合后2分钟以内发生凝集者判为阳性反应； 2分钟以内不出现凝集；或者出现均匀一致的 极微小颗粒；或在边缘处由于临干前出现絮状 者判为阴性反应； 其它情况可判为可疑反应。 （3）结果判定： 一、玻片凝集试验 试验组 阳性对照 阴性对照 示例 一、玻片凝集试验 二、试管凝集试验 原理：与玻片凝集试验相同 目的： (1) 学会倍比稀释法； (2) 掌握试管凝集操作方法及结果判定方法。 布氏杆菌试管凝集抗原 布氏杆菌阳性血清、阴性血清、被检血清 无菌0.5%石碳酸生理盐水 试管架、小试管、灭菌吸管等 实验材料（以布氏杆菌为例）： 二、试管凝集试验 取试管７只，将待检血清稀释成4个稀释度，并设对照。 加入抗原，充分震荡混合，置37℃，4-10小时，再置室温18-24小时 操作方法（注意加入抗原后的血清稀释度加倍了。） 二、试管凝集试验 弃0.5mL 明天５点３０分看结果 记录结果： （1）根据反应的有无及其强度进行判断，以-、+、++、+++、++++记录结果。 （2）以呈现50％凝集（++）现象的血清的最高稀释倍数，即为受检血清的凝集价。 二、试管凝集试验 - ：细菌不被凝集，液体浑浊，管底无伞状沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀，震荡时复呈均匀浑浊沉淀； + ：液体透明度不明显，25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀； 二、试管凝集试验 +++：液体几乎透明，75%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀，震荡时呈小或大絮片状； ++：液体中等浑浊，50%菌体凝集，管底有中等量的伞状沉淀，震荡时呈小絮片状； 二、试管凝集试验 ++++：液体完全透明，100%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀，震荡时呈大絮片状，但可打碎成小絮片状。 二、试管凝集试验 细菌不被凝集，管底中央出现圆点状沉淀 25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀 50%菌体凝集，管底有中等量的伞状沉淀 75%菌体凝集，管底有明显的伞状沉淀 100%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀 二、试管凝集试验 （1） 牛、马和骆驼的血清在1∶100稀释达++或以 上时，判为阳性反应；1∶50稀释呈++时判为 疑似反应。 （2）绵羊、山羊和猪的血清在1∶50稀释达++或以 上时，判为阳性反应；1∶25稀释呈++时判为 疑似反应。 结果判定： 二、试管凝集试验 在判定结果时，应考虑当地正常畜群的抗体水平，有否预防接种等。 作 业 完成实验报告 应包含以下要素： 目的 原理 实验器材 操作方法 结果判定 结论