生物新项目工程综合实验.docVIP

试验三、重组菌细胞破碎及酶活检测 1、试验目标 掌握超声波细胞破碎方法及木聚糖酶活性测定方法 2、试验原理 超声波是指频率超出人耳可听范围(16~21kHz)波，即频率为20kHz以上波。微生物细胞在超声波作用下，细胞结构受到破坏，而使细胞破碎。超声波进行细胞破碎效果和微生物种类、浓度、超声波频率、输出功率和破碎时间有亲密关系。使用超声波必需注意是控制强度在一定程度，即刚好低于溶液产生泡沫水平。 木聚糖酶活性通常是测定其水解底物木聚糖后生成产物还原末端——木糖增加量来进行，而木糖含量能够利用其和一些显色试剂（如DNS试剂，PAHBAH）反应后生成在特定波长下有特异吸收峰有色化合物，从而经过分光亮度法测出。 3、试验材料和设备 A.试剂 ①测定酶活用试剂：在试验一已配制 ②0.5%燕麦木聚糖： 0.5木聚糖溶于100mL无菌水中，在磁力搅拌器上搅拌使之呈均一悬浮液，加终浓度0.02%叠氮化钠预防微生物生长。 ③8XBindingbuffer： 40mmol/L咪唑，4mol/LNaCl,160mmol/LpH7.9Tris-HCl，最终pH调到7.9 B．试验设备 分光亮度计、水浴锅、pH计、冰、烧杯、煮沸电炉、煮沸用浮漂、移液管、磁力搅拌器、超声破碎仪、高速离心机、离心管 4、试验步骤 ①取前日分别在0h、2h、4h、6h、8h、10h所取1mL样品及用适量1XBindingbu